Das Möge Grünwald-Giemsa färben o Pappenheim ist eine Differenzialfärbetechnik, bei der Giemsa- und May Grünwald-Reagenzien gemischt werden. Es wird zur Unterscheidung normaler und abnormaler Blutzellen in peripheren Blut- und Knochenmarkabstrichen sowie zur Färbung von histologischen Schnitten und zytologischen Proben verwendet..
Beide Reagenzien - Giemsa und May Grünwald - stammen aus der Färbung vom Romanowsky-Typ, einer Technik, die auf der Kombination von sauren und basischen Farbstoffen basiert..
Giemsa verbesserte die Technik durch Stabilisierung der Mischung aus Eosin, Methylenblau und ihren Derivaten mit Glycerin. Stattdessen verwendet May Grünwald Eosin und Methylenblau unter Verwendung von Methanol als Lösungsmittel. Diese strategische Kombination hat zu hervorragenden Ergebnissen geführt.
Obwohl es in Bezug auf die Beobachtung der Zellmorphologie ähnlich wie die Giemsa- und Wright-Färbungen wirkt, verbessert diese Technik die vorherigen, indem die Färbung der Parasiten, die Malaria, Chagas-Krankheit, Leishmaniose und Trichomoniasis verursachen, verfeinert wird..
Darüber hinaus hat es sich als sehr nützliche Technik für die zytologische Untersuchung von Samenflüssigkeit erwiesen. Es zeichnete sich nicht nur dadurch aus, dass es die morphologischen Eigenschaften von Spermatozoen zeigte, sondern auch die Differenzierung von Leukozyten, Epithelzellen und Spermatogenesezellen mit großer Effizienz ermöglichte..
Artikelverzeichnis
Die Technik folgt der Grundlage von Romanowsky-Färbungen, bei denen saure Farbstoffe eine selektive Affinität zu basischen Zellkomponenten aufweisen und saure Komponenten basische Färbungen anziehen..
Auf andere Weise erklärt, haben sowohl Zellstrukturen als auch Farbstoffe positive oder negative elektrische Ladungen; wie Ladungen abstoßen und verschiedene Ladungen anziehen.
Beispielsweise sind basische Farbstoffe wie Methylenblau positiv geladen und werden von negativ geladenen Strukturen angezogen. Deshalb färbt dieser Farbstoff DNA- und RNA-reiche Kerne mit negativ geladenen Phosphatgruppen..
Das Granulat segmentierter Basophiler und die Zytoplasmen mononukleärer weißer Blutkörperchen, die RNA enthalten, werden ebenfalls gefärbt..
Ebenso trägt der Säurefarbstoff eine negative Ladung, weshalb er an positiv geladene Strukturen wie Erythrozyten und Granulate segmentierter Eosinophiler bindet. Das Granulat der segmentierten Neutrophilen fixiert beide Farbstoffe.
Bei dieser Technik besteht eine Kombination von Reaktionen zwischen orthochromatischen und metachromatischen Farbstoffen. Orthochromatika (Eosin und Methylenblau) binden an die Zellstruktur, mit der sie verwandt sind, und liefern eine stabile Farbe, die nicht variiert.
Andererseits variieren Metachromatika (die Derivate von Methylenblau-Azurblau A und Azurblau B) ihre ursprüngliche Farbe, sobald sie an die spezifische Struktur gebunden sind, und es kann sogar eine Vielzahl von Farbtönen geben.
Schließlich erfordert der Schritt, den die May Grünwald-Lösung unternimmt, die Anwesenheit von Wasser, da der Farbstoff ohne diesen die Strukturen durchdringt, aber nicht aushärtet. Dazu muss der Farbstoff polar werden oder ionisieren und somit ausfallen und an verwandte Strukturen binden können..
- Mikroskopische Objektträger.
- Brücken der Färbung.
- May-Grünwald-Lösung.
- Giemsa-Fleck.
- Destilliertes Wasser.
0,25 g Eosin-Methylenblau (Färbung nach May Grünwald) sollten abgewogen und in 100 ml Methanol gelöst werden. Dann wird das Präparat 1 Stunde lang gemischt und 24 Stunden lang ruhen gelassen. Wenn die Zeit abgelaufen ist, leckt es.
Um die Technik anzuwenden, muss der May Grünwald-Farbstoff wie folgt verdünnt werden: Für 200 ml verdünnten Farbstoff 30 ml der konzentrierten Lösung messen, 20 ml Pufferlösung und 150 ml destilliertes Wasser hinzufügen, eingestellt auf pH 7,2-7,3. Später wird es gemischt und gefiltert.
0,5 g Azur-Eosin-Methylenblau (Färbung nach Giemsa) müssen gewogen, in 50 ml Methanol gelöst und 50 ml Glycerin zu der Mischung gegeben werden.
Um die Technik durchzuführen, wird sie 1:10 mit Pufferlösung verdünnt und 10 Minuten stehen gelassen. Kann bei Bedarf gefiltert werden.
Sie sollten gewogen werden:
- 40 mg Kaliumdihydrogenphosphat (KH2PO4).
- 151 mg Dinatriumhydrogenphosphat 12-Hydrat (Na2HPO4).
Beide Verbindungen werden in 100 ml Wasser gelöst.
Es gibt zwei Modi: einen klassischen und einen schnellen.
Die hier beschriebenen Techniken sind eine Richtlinie, es sollte jedoch berücksichtigt werden, dass die Verfahren und Färbezeiten je nach Handelsunternehmen, das die Reagenzien vertreibt, variieren. Es ist ratsam, die von jedem Geschäftshaus streng angegebenen Schritte zu befolgen.
1- Decken Sie den Abstrich 4 Minuten lang mit einer dünnen Schicht der May Grünwald-Lösung ab.
2- Entfernen Sie den Farbstoff und waschen Sie ihn mit destilliertem Wasser.
3- Legen Sie eine Schicht verdünnten Giemsa (1:10) für 15 Minuten in destilliertes Wasser.
4- Entfernen Sie den Farbstoff und waschen Sie ihn mit destilliertem Wasser.
5- Trocknen lassen und im Mikroskop beobachten.
Die Technik erfordert, dass die Reagenzien und die Waschlösungen einen auf 7,2 bis 7,3 eingestellten pH-Wert aufweisen, damit die Affinitäten der Farbstoffe für die Zellstrukturen nicht verzerrt werden und die erwartete Endfarbe nicht variiert..
Diese Technik wird von klinischen Labors verwendet, um periphere Blut- und Knochenmarkabstriche, Gewebeschnitte und Zytologien zu färben..
Im hämatologischen Bereich ist diese Technik von entscheidender Bedeutung für die Untersuchung von Anomalien von Zellen in Bezug auf Form, Größe und Anzahl. Es ist ein sehr wertvolles Instrument zur Diagnose bestimmter Krankheiten wie Leukämien und Anämien.
Darüber hinaus ist es von hervorragendem Nutzen bei der Suche nach Parasiten in hämatologischen Gebieten (Plasmodium sp Y. Trypanosom Cruzi) oder histologisch (Leishmanias sp).
In Bezug auf die vaginale Zytologie ist diese Technik besonders vorteilhaft für die Beobachtung von Trichomonas vaginalis. Dies ist ein wichtiger Befund, da seine Anwesenheit Bilder von Karzinomen simuliert. vor Ort die dann verschwinden, wenn der Parasit entfernt wird.
Es war ein ideales Werkzeug für die Untersuchung von Spermienproben, da es wertvolle Informationen über die Qualität der Spermien liefert.
Die angebotenen Daten haben hauptsächlich mit Anzahl und Morphologie sowie mit den möglicherweise vorhandenen und von entscheidender Bedeutung befindlichen Begleitzellen wie Keimzellen, Leukozyten und Epithelzellen zu tun..
Mit dieser Analyse ist es möglich, Anomalien zu beschreiben, die in den Spermien in Kopf, Hals, Mittelstück und Hauptteil beobachtet werden..
Darüber hinaus können sie auch dazu beitragen, Fälle von Hämospermie (Vorhandensein roter Blutkörperchen im Sperma) und Leukospermie oder Piospermie (erhöhte Anzahl von Leukozyten im Sperma) aufzuzeigen..
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