Das BIGGY-Agar Es ist ein festes, selektives und differenzielles Kulturmedium. Es wurde entwickelt, um die Identifizierung der wichtigsten Candida-Arten zu isolieren und zu unterstützen. Sein Name BIGGY kommt vom Akronym in der englischen Wismut-Glucose-Glycin-Hefe.
Die ursprüngliche Formel wurde von Nickerson erstellt, weshalb dieses Medium auch als Nickerson-Agar bekannt ist. Derzeit besteht es aus Hefeextrakt, Glycin, Dextrose, Ammoniumcitrat, Wismutcitrat, Natriumsulfit und Agar..
BIGGY-Agar wird zur Differenzierung von Artenkomplexen formuliert C. albicans, C. tropicalis, C. krusei und C. kefyr, aber auch andere Arten wachsen wie Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp., Geotrichum candidum und Saccharomyces cerevisiae.
Es hat eine gute Empfindlichkeit und Spezifität, steht jedoch im Vergleich zu anderen Medien mit ähnlicher Funktion an zweiter Stelle und wird von CHROMagar übertroffen. Aus diesem Grund bevorzugen viele Labors Letzteres, obwohl es viel teurer ist..
Es sollte klar sein, dass die Verwendung von BIGGY-Agar sowie anderer ähnlicher Mittel eine schnelle mutmaßliche Identifizierung erleichtert, jedoch niemals bestätigt. Daher müssen zusätzliche Identifikationsmethoden verfügbar sein. B. Vitek 32- und API 20-Identifikationssysteme.
Artikelverzeichnis
BiGGY-Agar wird als teilweise selektives Medium zur Isolierung von Hefen, insbesondere der Gattung Candida, angesehen, obwohl andere Gattungen wachsen können.
Es ist auch ein Differenzmedium, da je nach Art unterschiedliche Eigenschaften in Bezug auf Aussehen, Farbe, Form und Größe beobachtet werden. Aufgrund der Entwicklung verschiedener Farben in den Kolonien wird es als chromogenes Medium angesehen.
Die Farbe der Hefekolonien ist auf das Vorhandensein von Wismutsulfit im Agar zurückzuführen. Nickerson erkannte, dass Hefen der Gattung Candida eine extrazelluläre Reduktion von Wismutsulfit durchführen und es in Wismutsulfid (eine unlösliche schwarze Substanz) umwandeln. Dies führt zu hellbraunen bis schwarzen Kolonien..
Dieser Agar enthält Hefeextrakt und Dextrose, die die Quelle für grundlegende Nährstoffe und Energie für die Hefeentwicklung darstellen. Glycin ist ein Hefewachstumsstimulans und hemmt gleichzeitig das Wachstum bestimmter Bakterien.
In diesem Sinne wirken Ammonium- und Wismutcitrat sowie Natriumsulfit als Inhibitoren des Bakterienwachstums. Agar ist das Mittel, das die mittlere feste Konsistenz ergibt.
45 g des dehydrierten Kulturmediums werden gewogen und in einem Liter destilliertem Wasser gelöst. Schütteln und erhitzen Sie die Mischung und kochen Sie sie 1 Minute lang, bis sie sich vollständig aufgelöst hat. Dieses Kulturmedium ist nicht autoklavierbar.
Wenn Sie in einem Wasserbad auf ca. 45 ° C abkühlen, gießen Sie 20 ml auf sterile Petrischalen..
Die Farbe des dehydrierten Mediums ist gelblichgrau und es wird ein gelblichweißes Gel hergestellt, in dem ein leicht ausflockender Niederschlag beobachtet werden kann.
Der pH sollte 6,8 ± 0,2 betragen.
Das vorbereitete Medium sollte im Kühlschrank (4 ° C) aufbewahrt und vor Licht geschützt werden. Da es sich um ein Medium handelt, das nicht autoklaviert werden kann, sollte es so bald wie möglich verwendet werden. Die Verwendung wird innerhalb von 3 Tagen nach der Herstellung empfohlen.
Die Platten werden 24, 48 und 72 Stunden bei Raumtemperatur (25 ° C) inkubiert und die Inkubationszeit kann auf bis zu 5 Tage verlängert werden..
Jede Candida-Art entwickelt bestimmte Merkmale, die sich voneinander unterscheiden. Die Hersteller des Mediums beschreiben die folgenden Merkmale für jede Art:
-Candida albicans-Komplex: entwickelt sich auf diesem Agar als glatte, runde, braune oder schwarze Kolonien mit einem leichten Myzelrand. Mit der Ausnahme, dass die dunkle Farbe nicht zum Medium diffundiert.
-Candida tropicalis: Die Kolonien sind hell, klein, dunkelbraun, mit einem schwarzen Zentrum und einem leichten Myzelrand. Die dunkle Farbe diffundiert zur Mitte hin, eine für diese Art typische Eigenschaft, nachdem sie 72 Stunden lang inkubiert wurde..
-Candida krusei entwickelt große, flache, rau aussehende Kolonien mit einem braunen bis schwärzlichen Rand.
-Candida parakrusei: mittelgroße Kolonien, meist rau, flach. Die Farbe kann von hellem Dunkelrotbraun bis Hellrotbraun variieren. Die Grenze der Kolonien hat ausgedehntes, gelbliches Myzel.
-Candida stellatoidea: Entwickelt mittlere, flache, dunkelbraune, fast schwarze Kolonien. Die Myzelentwicklung ist sehr selten.
Eine 2003 von Yücesoy und Marol durchgeführte Studie zeigte, dass CHROMagar-Medium eine bessere Empfindlichkeit und Spezifität für die Differenzierung und Identifizierung verschiedener Candida-Arten aufweist als BIGGY-Agar..
Für die Sterilitätskontrolle werden nicht inokulierte Platten bei 25 ° C im Dunkeln 24 bis 48 Stunden lang inkubiert. Es wird erwartet, dass keinerlei Wachstum oder Farbveränderung auftritt..
Die für die Qualitätskontrolle des Mediums empfohlenen ATCC-Stämme sind:
Candida albicans-Komplex ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. In allen von ihnen wird Wachstum wie oben beschrieben erwartet..
Die folgenden Stämme können ebenfalls verwendet werden:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 und Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. In den ersten beiden Fällen wird eine vollständige Hemmung erwartet, bei teilweise wachsenden Kolonien werden sie jedoch cremefarben sein.
Im Falle von S. aureus Es wird erwartet, dass es vollständig gehemmt wird, aber wenn sie teilweise wachsen, sind ihre Kolonien weiß.
Einige Bakterien können sich in diesem Medium entwickeln und können sogar eine dunkle Farbe annehmen, was eine Candida-Kolonie simuliert. Wenn die Kolonie jedoch verschmiert und unter einem Mikroskop beobachtet wird, kann sie leicht verworfen werden.
Tabelle: Eigenschaften der Kolonien einiger Hefen auf BIGGY-Agar gemäß der Arbeit von Yücesoy M und Marol S..
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