Das Kinyoun-Fleck ist eine Färbetechnik, die verwendet wird, um säurefeste Bakterien und Parasiten zu färben. Es wurde aus der Modifikation der Ziehl-Neelsen-Färbung geboren; Beide Techniken werden auf die gleiche Weise interpretiert, unterscheiden sich jedoch in zwei Elementen: bei der Herstellung des Hauptreagenzes und darin, dass die Kinyoun-Technik keine Wärme verwendet.
Aus diesem Grund wird es auch als kaltmodifizierter Ziehl-Neelsen- oder Kinyoun-Kaltfleck bezeichnet. Es ist für die Färbung von angegeben Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atypische Mykobakterien, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris Y. Cyclosporas cayetanensis.
Es ist erwähnenswert, dass die Nocardia bei dieser Technik schwach färben, da sie teilweise säurealkoholresistent sind. Daher gibt es für diese Gattung eine Modifikation der Methodik.
Die kalte Kinyoun-Technik wurde wiederum mit der von Didier modifizierten Trichromtechnik zum Nachweis von Kokzidien kombiniert (Cryptosporidium parvum und Isospora belli) und Mikrosporidiensporen (Enterocytozoon bieneusi Y. Encephalitozoon intestinalis).
Artikelverzeichnis
Das Hauptfärbungsreagenz ist Carbolfuchsin oder Carbolfuchsin, das die Eigenschaft hat, an die in der wachsartigen Zellwand vorhandenen Carbolsäuren zu binden, die reich an Lipiden (Mykolsäuren) von Mykobakterien und bestimmten Parasiten sind..
Dieser Bindung wird durch das Säurebleichmittel nicht entgegengewirkt; Daher werden Mikroorganismen als säurealkoholresistent definiert.
Im Gegensatz zur Ziehl-Neelsen-Technik, bei der der Farbstoff durch Hitze fixiert wird, ist dieser Schritt bei der Kinyoun-Technik nicht erforderlich, da die für diese Technik hergestellte Carbol-Fuchsin-Lösung eine hohe Phenolkonzentration enthält..
Phenol löst das Lipidmaterial in der Zellwand auf und lässt den Carbolfuchsin-Farbstoff eintreten. Nachdem der Farbstoff eingedrungen ist, bleibt er trotz Waschen mit dem sauren Alkohol fixiert.
Auf diese Weise nehmen säurebeständige Mikroorganismen die charakteristische rote Farbe an, während alles, was nicht säurebeständiger Alkohol ist, verfärbt und blau gefärbt wird..
- Modifiziertes Carbolfuchsin.
- Alkoholsäure.
- Methylenblau.
- Grundfuchsin: 4 gr.
- Phenol: 8 ml.
- Alkohol (95%): 20 ml.
- Destilliertes Wasser: 100 ml.
Das basische Fuchsin sollte langsam unter ständigem Mischen im Alkohol gelöst werden. Anschließend wird das kristallisierte Phenol in einem Wasserbad bei 56 ° C geschmolzen. Nach dem Auflösen werden 8 ml zu der oben hergestellten Fuchsinlösung gegeben.
- Konzentrierte Salzsäure: 3 ml.
- Ethanol (95%): 97 ml.
Es muss gemessen, verbunden und gemischt werden.
- Methylenblau: 0,3 g.
- Destilliertes Wasser: 100 ml.
Es wird gewogen und aufgelöst.
1- Bereiten Sie einen Abstrich direkt aus der Probe vor, der unter anderem Sputum, Lungenflüssigkeit, Urinsediment, Liquor cerebrospinalis oder Kot sein kann. oder aus einer Suspension von Mikroorganismen, die aus reinen Kolonien erhalten wurden, die in primären Kulturmedien entwickelt wurden.
2- Fixieren Sie den Abstrich mit Hitze.
3- Legen Sie den Abstrich auf die Färbebrücke und bedecken Sie ihn mit dem vorbereiteten Kinyoun-Carbol-Fuchsin-Reagenz. 3 oder 5 Minuten ruhen lassen.
4- Mit destilliertem Wasser waschen.
5- 3 Minuten mit saurem Alkohol bleichen und erneut mit destilliertem Wasser waschen.
6- Bleichen Sie erneut 1 oder 2 Minuten lang mit saurem Alkohol, bis keine Färbung mehr vorhanden ist.
7- Mit destilliertem Wasser waschen und abtropfen lassen. Den Objektträger in eine vertikale Position bringen.
8- Decken Sie das Präparat mit Methylenblau ab und lassen Sie es 4 Minuten einwirken.
9- Mit destilliertem Wasser waschen und an der Luft trocknen lassen.
10- Untersuchen Sie bei 40X und dann bei 100X.
Wenn Sie die Färbung von säurefesten Mikroorganismen verbessern und beschleunigen möchten, geben Sie 1 Tropfen eines Netzmittels (wie Tergitol Nr. 7) zu 30 oder 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.
Einige Labore ändern den Methylenblau-Kontrastfarbstoff in hellgrün oder Pikrinsäure. Der erste gibt dem Hintergrund eine grüne Farbe und der zweite eine gelbe Farbe.
Um die Färbung von Bakterien der Gattung Nocardia zu verbessern, wird eine Modifikation der Kinyoun-Färbung verwendet. Die Technik ist wie folgt:
1- Decken Sie den Abstrich 3 Minuten lang mit Kinyoun Carbol Fuchsin ab.
2- Mit destilliertem Wasser waschen.
3- Mit 3% igem saurem Alkohol kurz verfärben, bis keine Färbung mehr erfolgt.
4- Nochmals mit destilliertem Wasser waschen.
5- Decken Sie das Präparat mit Methylenblau ab und lassen Sie es 30 Sekunden lang stehen.
6- Mit destilliertem Wasser waschen und an der Luft trocknen lassen.
Diese Technik wird für die Analyse von Stuhlproben auf Kokzidien und Sporen von empfohlen Microsporidium sp gleichzeitig. Das folgende Verfahren ist wie folgt:
1- Decken Sie den Abstrich 10 Minuten lang mit Kinyoun Carbol Fuchsin ab.
2- Entfernen Sie den Farbstoff und waschen Sie ihn mit destilliertem Wasser.
3- 30 Sekunden mit Salzsäurealkohol bleichen.
4- Nochmals mit destilliertem Wasser waschen.
5- Decken Sie den Abstrich 30 Minuten lang bei 37 ° C mit Trichromlösung ab.
6- Mit destilliertem Wasser waschen.
7- 10 Sekunden mit Essigsäurealkohol bleichen.
8- Waschen Sie den Abstrich 30 Sekunden lang mit 95% Ethanol.
Als positive Kontrolle werden Abstriche mit Stämmen von hergestellt Mycobacterium tuberculosis und mit den vorbereiteten Reagenzien färben, um sicherzustellen, dass die Bakterien die richtige Farbe annehmen (Rot-Fuchsie).
Negativkontrollen können auch verwendet werden, um Abstriche mit jedem Stamm herzustellen, der nicht säurefest ist, wodurch überprüft wird, ob die gesamte Probe die Kontrastfarbe annimmt..
Die Kinyoun-Technik ist einfacher, da sie den Erwärmungsschritt eliminiert. Ihr Hauptvorteil besteht jedoch darin, dass die Emission von hochgiftigen und krebserregenden Dämpfen langfristig vermieden wird. Daher ist die Kinyoun-Färbung für das Färben von Personal sicherer..
Es ist wichtig zu berücksichtigen, dass darauf geachtet werden muss, dass die Reagenzien nicht in direkten Kontakt mit der Haut kommen, da sie ätzend sind und das Bleichmittel entflammbar ist..
Was die Nachteile betrifft, bedeutet ein negativer Abstrich nicht unbedingt, dass der Organismus nicht vorhanden ist. Darüber hinaus kann das Vorhandensein von Zelltrümmern zu falsch positiven Ergebnissen führen, was zu Verwirrung bei der Diagnose führt..
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