Das Hämatoxylin-Eosin-Färbung ist eine Färbetechnik, die die Kombination von Hämatoxylin- und Eosinfarbstoffen verwendet. Dieses Farbstoffpaar bildet ein perfektes Duo, da Hämatoxylin als basischer Farbstoff und Eosin als saurer Farbstoff fungiert..
Die Bezeichnung von basischen oder sauren Farbstoffen bezieht sich nicht auf den pH-Wert, den sie in Lösung erhalten, sondern spricht vom vorherrschenden Anteil in Bezug auf die anionischen oder kationischen Ladungen, die sie besitzen, oder durch den Ort der Chromophorgruppe..
In diesem Sinne wird Hämatoxylin als basischer (kationischer) Farbstoff angesehen und hat daher eine Affinität zu Säurestrukturen wie dem Zellkern. Während Eosin als saurer (anionischer) Farbstoff eine Affinität zu alkalischen oder basischen Strukturen wie Zellzytoplasma aufweist.
Aus diesem Grund wird diese Kombination von Farbstoffen häufig zur Gewebefärbung verwendet, da dadurch Kerne und Zytoplasmen klar unterschieden werden können. Die Kerne färben sich dunkelblau oder lila und das Zytoplasma rosa.
Die Hämatoxylin-Eosin-Färbung ist aufgrund ihrer einfachen Handhabung und geringen Kosten eine der am häufigsten verwendeten Färbetechniken auf dem Gebiet der Histologie und Zytologie. Es wird zur Visualisierung von Zellen, dicken Nervenfasern und dem Vorhandensein bestimmter Mikroorganismen im Gewebe verwendet, wie z. B. Parasiten, Pilze und Bakterien.
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Hämatoxylin ist ein neutraler Farbstoff. Die Komponente, die die Farbe liefert (Chromophor), befindet sich jedoch im kationischen oder basischen Zentrum des Moleküls. Daher seine Affinität zu Säurestrukturen. Seine chemische Formel lautet C.16H.14ODER6 und sein wissenschaftlicher Name 7,11b-Dihydroindeno [2,1-c] Chrom-3, 4,6a, 9,10 (6H.) -Pentol.
Es färbt hauptsächlich die Zellkerne, da diese sehr reich an Nukleinsäuren sind. Es kann auch zytoplasmatische Einschlüsse viralen Ursprungs färben.
Damit sich Hämatoxylin färben kann, muss es sich in einem oxidierten Zustand befinden und an ein Metall gebunden sein. Letzteres dient zur Fixierung am Gewebe, dh es wirkt als Beizmittel.
Wenn Hämatoxylin oxidiert wird, spricht man von Hämatein. Die Oxidation wird durch Einwirkung von Sauerstoff (Alterung) des Reagenzes oder durch Substanzen erreicht, die dessen Oxidation unterstützen (chemische Oxidation)..
Eosin ist ein Farbstoff, der rot oder rosa färbt. Es ist in Wasser unlöslich, obwohl es eine wasserlösliche Version gibt. Im Allgemeinen wird Eosin durch Auflösen in Alkohol (95 ° Ethanol) hergestellt..
Es färbt Zytoplasmen, Muskelfasern, zytoplasmatische Organellen und Kollagen, färbt jedoch keine Zellkerne. Dies liegt daran, dass es negativ geladen ist und daher eine Affinität zu positiv geladenen Strukturen aufweist..
Es gibt zwei Arten von Eosin "Y" und "B". Eosin "Y" ist als gelbes Eosin bekannt. Sein wissenschaftlicher Name ist Tetrabromfluorescein und seine chemische Formel ist C.zwanzigH.8Br4ODER5.
Andererseits wird Eosin "B" manchmal als bläuliches Erythrosin B bezeichnet. Sein wissenschaftlicher Name ist Dibromdinitrofluorescein und die Formel ist C.zwanzigH.8BrzweiN.zweiODER9. Beide sind sehr ähnlich und der Unterschied zwischen der Verwendung des einen oder anderen ist nicht wirklich spürbar. Am beliebtesten ist jedoch Eosin "Y".
Eosin hat die Eigenschaft, zwischen einer lebenden und einer toten Zelle zu unterscheiden, da es nur dann in der Lage ist, die Membran zu durchqueren, um ihr Zytoplasma zu färben, wenn die Zellen tot sind, und das Zytoplasma der Zelle farblos zu lassen, wenn es am Leben bleibt.
Mit Hämatoxylin-Eosin können dicke Nervenfasern angefärbt und identifiziert werden. Es ist jedoch nicht zum Färben der dünnen Nervenfasern nützlich, da eine Silberfärbung erforderlich ist, um letztere sichtbar zu machen..
Bei der Färbung der Hornschicht der Haut wirkt als Farbstoff Eosin, da die Zellen auf dieser Ebene keinen Zellkern haben.
In der körnigen Hautschicht färbt Hämatoxylin das Keratohyalin-Granulat in den Granulatzellen stark an. Im Gegenteil, die Dornschicht der Haut ist schwach mit Hämatoxylin gefärbt, während die Grund- oder Keimschicht ausreichend gefärbt ist.
Eosin färbt das Zytoplasma aller Zellen und die Intensität der Farbe kann von Schicht zu Schicht variieren..
Gómez et al., 2005 zeigten, dass die Hämatoxylin-Eosin-Färbung bei der Identifizierung von Fällen von Amöbiasis aufgrund von wirksamer war Entamoeba histolytica Y. Entamoeba dispar als die frische Visualisierungsmethode (Kochsalzlösung und Lugol) bei Patienten mit akuter Durchfallerkrankung.
Es wurde auch gezeigt, dass es hochempfindlich ist, um Erythrophagozytose (Amöben, die Erythrozyten verschlungen haben) nachzuweisen..
Walwyn et al. Schlugen 2004 die Verwendung von histologischen Färbungen zum Nachweis infektionsverursachender Mikroorganismen vor.
Mithilfe der Hämatoxylin-Eosin-Färbung konnten sie Infektionen sichtbar machen, die durch verursacht wurden Clostridium, Actinomyces, Spirillen oder Candida. Es gelang ihnen auch, das Vorhandensein des Parasiten zu beobachten Sarcoptes escabiei in Hautschnitten und viralen Einschlüssen durch Cytomegalievirus und Herpes in Schnitten verschiedener Gewebe.
Die Färbung des histologischen Schnitts durchläuft eine Reihe von Schritten. Das erste ist, den histologischen Abschnitt zu erhalten. Dies muss gewachst werden, um später die Schnitte (ultrafein) mit einem Mikrotom zu erhalten. Die Technik besteht aus folgenden Schritten:
1-Beseitigung von überschüssigem Paraffin: Hierfür können Sie Xylol oder Häm-D verwenden und 3-5 Minuten eintauchen.
2-Rehydration der Probe: Dies wird erreicht, indem die Probe in absteigender Reihenfolge (100 °, 90 °, 70 °) in verschiedene Konzentrationen von Alkoholen (Ethanol) getaucht wird. In allen Fällen für 7 Minuten.
3-Beseitigung von überschüssigem Alkohol: Dazu wird es 7 Minuten in Wasser getaucht.
4-Färbung mit Hämatoxylin: Die Probe wird 6-10 Minuten in eine Schale mit Hämatoxylin getaucht. Die Belichtungszeit hängt von der Größe und Dicke der Probe ab..
5-Eliminierung von überschüssigem Hämatoxylin: Es wird 5 Minuten mit Wasser gewaschen und dann wird ein schneller Durchgang (10 bis 20 Sekunden) durch sauren Alkohol durchgeführt. Später wird es erneut 5 Minuten mit Wasser gewaschen. Dann wird es 1 Minute lang bei 96 ° in Ethanol getaucht.
6-Färbung mit Eosin: Dazu wird die Probe 5 Minuten in die Eosinschale getaucht.
7-Dehydratisierung der Probe: Dazu werden die Alkohol- (Ethanol-) Schalen wieder durchlaufen, diesmal jedoch in aufsteigender Reihenfolge. (70 °, 90 °, 100 °). (Für 5 Sekunden, 5 Sekunden bzw. 1 Minute).
8-Klärung der Probe: Dazu wird es 5-10 Minuten lang Xylol ausgesetzt und getrocknet, um dauerhaft mit Kanada-Balsam oder einem ähnlichen Material zu versiegeln.
Ein Abstrich wird mit dem Stuhl des Patienten auf einem Objektträger gemacht und 5 Minuten lang mit 80% Alkohol fixiert. Das Blatt wird 5 Minuten in Hämatoxylin getaucht und sofort mit Wasser gewaschen..
Anschließend wird es schnell in sauren Alkohol und dann in Ammoniakwasser getaucht. Es wird mit Wasser gewaschen. Es wird 5 Minuten in Eosin gefärbt. Die Probe wird wie im Stand der Technik erläutert dehydratisiert und schließlich mit Xylol gespült.
In einem Liter destilliertem Wasser werden 50 g Kalium- oder Ammoniumaluminiumsulfat gelöst. Nach vollständiger Auflösung 1 g kristallisiertes Hämatoxylin zugeben. Nach dem vollständigen Auflösen wird 1 g Zitronensäure zusammen mit 50 g Chloralhydrat und 0,2 g Natriumiodat zugegeben..
Die Mischung wird 5 Minuten gekocht, dann abkühlen gelassen und filtriert, um alle verbleibenden festen Partikel zu entfernen. Das so hergestellte Reagenz kann sofort verwendet werden.
Es kann mit einer alkoholischen Basis oder mit einer Wasserbasis hergestellt werden.
In 100 ml Ethanol bei 95 ° werden 0,5 g Eosin "Y" gelöst. Dann einige Tropfen Eisessig hinzufügen.
In 1250 ml destilliertem Wasser werden 25 g wasserlösliches Eosin "Y" gelöst. Dann einige Tropfen Eisessig hinzufügen.
0,5 ml konzentrierte Salzsäure abmessen und mit absolutem Alkohol auf 100 ml auffüllen.
Messen Sie 0,5 ml konzentriertes Ammoniak und füllen Sie es mit destilliertem Wasser auf 100 ml auf.
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