Das Vogel-Johnson-Agar ist ein festes, selektives und differenzielles Kulturmedium, das speziell für die Isolierung von Staphylococcus aureus. Dieses Medium wurde 1960 von Vogel und Johnson aus der Modifikation des 1955 von Zebovitz, Evans und Niven formulierten Tellurit-Glycin-Agars hergestellt..
Die Modifikation bestand darin, die im Medium vorhandene Mannitkonzentration zu erhöhen und einen pH-Indikator einzubauen. Die derzeitige Formel besteht aus Triptein, Hefeextrakt, Mannit, Dikaliumphosphat, Lithiumchlorid, Glycin, Phenolrot, Agar, 1% iger Kaliumtelluritlösung und Wasser..
Es sollte beachtet werden, dass es andere Medien gibt, die wie Vogel-Johnson-Agar für die Isolierung von selektiv sind S. aureus, wie salziger Mannit-Agar und Baird Parker-Agar. In diesem Sinne könnte man sagen, dass die Grundlage von Vogel-Johnson-Agar eine Mischung aus salzigem Mannit-Agar und Baird Parker-Agar ist..
In der ersten die Kolonien von S. aureus Sie zeichnen sich dadurch aus, dass das Mannit fermentiert und der pH-Indikator gelb wird. Auf der anderen Seite, in der zweiten die S. aureus Es ist gekennzeichnet durch die Reduktion von Tellurit zu Tellur und die Bildung grauer bis schwarzer Kolonien. Beide Eigenschaften werden in Vogel-Johnson-Agar beobachtet..
Dieses Medium ist wie seine Gegenstücke zum Nachweis von nützlich Staphylococcus aureus in Lebensmittelproben, Hygienekontrollen von Industrieprodukten und in klinischen Proben.
Artikelverzeichnis
Vogel-Johnson-Medium enthält Triptein und Hefeextrakt; Beide Substanzen liefern langkettige Aminosäuren, die als Kohlenstoff- und Stickstoffquellen dienen, die für das Bakterienwachstum notwendig sind. Bakterien, die in diesem Medium wachsen können, nehmen die Nährstoffe aus diesen Substanzen auf..
Vogel-Johnson-Agar ist in der Lage, das Wachstum von gramnegativen Bakterien und sogar einiger grampositiver Bakterien zu hemmen, was die Entwicklung von Koagulase-positiven Staphylokokken begünstigt. Die Hemmstoffe sind Kaliumtellurit, Lithiumchlorid und Glycin..
Die Substanzen, die dieses Differenzmedium ausmachen, sind Mannit und Kaliumtellurit. Mannit ist ein Kohlenhydrat, und wenn es fermentiert wird, entstehen Säuren, die das Medium von rot nach gelb verwandeln lassen, was dank des Vorhandenseins des pH-Indikators für rotes Phenol geschieht..
Während das farblose Tellurit, wenn es zu freiem metallischem Tellur reduziert wird, eine dunkelgraue bis schwarze Farbe annimmt..
Das Staphylococcus aureus fermentiert Mannit und reduziert Tellurit zu Tellur. Deshalb sind die typischen Kolonien von S. aureus in diesem Medium sind sie grau oder schwarz, umgeben von einem gelben Medium.
Bakterien, die in diesem Medium wachsen und Tellurit nicht reduzieren oder Mannit fermentieren, bilden transparente Kolonien, die von einem rot gefärbten Medium umgeben sind, das aufgrund der Alkalisierung des Mediums durch Verwendung von Peptonen noch intensiver als die ursprüngliche Farbe ist.
Andererseits wachsen Bakterien, die Tellurit reduzieren, aber Mannit nicht fermentieren, als graue oder schwarze Kolonien, die von einem tiefroten Medium umgeben sind..
Wenn das Medium ohne Zugabe von Kaliumtellurit hergestellt würde, würden Kolonien von S. aureus würde sich als gelbe Kolonien entwickeln, umgeben von einem gelben Medium, wie in salzigem Mannitagar.
Dikaliumphosphat hält das osmotische Gleichgewicht des Mediums aufrecht und stellt den pH-Wert auf Neutralität ein. 7.2. Während der Agar dem Kulturmedium die feste Konsistenz verleiht.
Diese Lösung ist nicht im dehydrierten Medium enthalten, da sie in einem Autoklaven nicht sterilisiert werden kann. Aus diesem Grund wird es separat hergestellt und dem bereits sterilisierten Medium zugesetzt..
Einige Handelshäuser verkaufen die gebrauchsfertige 1% ige Kaliumtelluritlösung. Wenn Sie sich im Labor vorbereiten möchten, gehen Sie wie folgt vor:
1,0 g Kaliumtellurit abwiegen und 100 ml destilliertes Wasser abmessen. Löse das Kaliumtellurit in einem Teil Wasser und vervollständige dann die Wassermenge bis 100 ml erreicht sind. Sterilisieren Sie die Lösung durch Filtration.
60 g des dehydrierten Mediums werden gewogen und in 1 Liter destilliertem Wasser gelöst. Die Mischung wird zum Kochen erhitzt, um die vollständige Auflösung zu unterstützen. Während des Auflösungsprozesses wird das Medium häufig gerührt.
Sterilisieren Sie im Autoklaven bei 15 Pfund Druck und 121 ° C für 15 Minuten. Aus dem Autoklaven nehmen und ruhen lassen, bis das Medium eine Temperatur von ca. 45 bis 50 ° C erreicht. 20 ml der zuvor hergestellten 1% igen Kaliumtelluritlösung zugeben.
Mischen und in sterile Petrischalen gießen. Erstarren lassen und invertiert auf Plattenhaltern bestellen, um sie später bis zur Verwendung im Kühlschrank zu lagern.
Der endgültige pH-Wert des hergestellten Mediums muss 7,2 ± 0,2 betragen.
Warten Sie vor der Aussaat einer Probe, bis die Platte Raumtemperatur erreicht hat..
Die Farbe des vorbereiteten Mediums ist rot.
Obwohl es zur Isolierung von verwendet werden kann S. aureus In jeder Art von Proben wird es hauptsächlich zur mikrobiologischen Analyse von pharmazeutischen Produkten, Kosmetika und Lebensmitteln verwendet.
Es wird empfohlen, dass das Inokulum dicht ist. Die Aussaat kann durch Streifenbildung mit einem Platingriff oder durch Oberfläche mit einem Drigalski-Spatel erfolgen.
Die Platten werden 24 bis 48 Stunden bei 35-37 ° C in Aerobiose inkubiert.
Die folgenden Kontrollstämme können verwendet werden, um eine Qualitätskontrolle auf dem Vogel-Johnson-Medium durchzuführen:
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 oder Proteus mirabilis ATCC 43071.
Das erwartete Ergebnis ist wie folgt: für Stämme von S. aureus Befriedigendes Wachstum mit schwarzen Kolonien, umgeben von gelbem Medium. Damit S. epidermidis regelmäßiges Wachstum mit durchscheinenden oder schwarzen Kolonien, umgeben von rotem Medium.
Ebenso für E coli totale Hemmung wird erwartet, und für Proteus mirabilis teilweise oder vollständige Hemmung; Wenn es wächst, wird es sparsam sein und die Kolonien werden schwarz sein, umgeben von roter Hälfte.
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