Das Wismutsulfit-Agar ist ein festes, selektives und differenzielles Kulturmedium, das speziell für die Isolierung von Salmonella enterica Untergruppe enterica Serotyp Typhi, unter anderen Arten von Salmonellen. Das Medium ist als BSA-Agar für sein Akronym im englischen Wismutsulfit-Agar bekannt..
Die ursprüngliche Formel für Wismutsulfit-Agar wurde 1927 von Wilson und Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium) entwickelt. Dieses enthielt Natriumsulfit, Glucose, Wismutlösung, Ammoniumcitrat, Eisensulfat und Agar-Agar..
Heute gibt es eine Modifikation des ursprünglichen Mediums, bestehend aus Fleischextrakt, Fleisch- und Kaseinpeptonen, Wismutsulfitindikator, Glucose, Dinatriumphosphat, Eisensulfat, Hellgrün und Agar-Agar..
Es gibt viele Mittel zur Isolierung von Salmonella-Arten, aber wenn es um die Gewinnung des Typhi-Serotyps geht, hat Wismutsulfit-Agar einen bemerkenswerten Vorteil gegenüber ihnen, da in den meisten Fällen eine sehr geringe oder keine Gewinnung dieses Mikroorganismus erzielt wird..
Es ist jedoch notwendig, mehr als eine Art von Medium zu verwenden, wenn versucht wird, Enteropathogene zu isolieren, da Wismutsulfit-Agar für andere Salmonella-Arten und für die Shigella-Gattung, die in diesem Agar gehemmt sind oder sich sehr schlecht entwickeln, weniger wirksam ist.
Es ist zu beachten, dass der Typhi-Serotyp von allen Salmonella-Arten eines der wichtigsten Enteropathogene beim Menschen ist und das einzige Reservoir ist. Dieser Serovar verursacht Typhus, Gastroenteritis, Bakteriämie und Septikämie..
Aus diesem Grund ist es wichtig, diesen Agar bei der Analyse von Wasser, Kot oder Lebensmittelproben einzubeziehen, wenn der Verdacht auf Vorhandensein besteht..
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Wie die meisten Kulturmedien enthält Wismutsulfit-Agar Nährstoffe wie Peptonen und Fleischextrakt, um das Bakterienwachstum zu fördern. Ebenso wirkt Glukose als Energie- und Kohlenstoffquelle..
Auf diesem Medium wachsen jedoch nicht alle Bakterien, da Wismutsulfitagar ein selektives Medium ist. Es enthält Verbindungen, die das Wachstum von grampositiven Mikroorganismen und bestimmten gramnegativen Bakterien hemmen. Diese Verbindungen sind: der Indikator Wismutsulfit und hellgrün.
Dinatriumphosphat seinerseits behält die Osmolarität und den pH-Wert des Mediums bei.
Zusätzlich ist Wismutsulfit-Agar dank der Anwesenheit von Eisensulfat, das die Bildung von H zeigt, ein DifferenzmediumzweiS. Die H.zweiVon Bakterien gebildetes S reagiert mit Eisensulfat und bildet einen deutlich sichtbaren unlöslichen schwarzen Niederschlag.
Schließlich verleiht der Agar-Agar dem Medium die feste Konsistenz..
52,3 g des dehydrierten Mediums werden abgewogen und in einem Liter Wasser gelöst. Erhitze die Mischung unter häufigem Rühren 1 Minute lang zum Kochen, bis sie sich vollständig aufgelöst hat. Überhitzen Sie nicht zu stark. Dieses Medium wird nicht autoklaviert, da extreme Hitze das Kulturmedium schädigt..
Vor dem Servieren in sterilen Petrischalen auf 45 ° C abkühlen lassen und schütteln. Es wird empfohlen, Platten mit guter Dicke herzustellen. Dazu müssen 25 ml in jede Platte gegossen werden. Erstarren lassen. Da es sich um ein Medium handelt, das nicht sterilisiert ist, ist es normal, dass eine sofortige Verwendung empfohlen wird.
Eine 1977 von D'aoust durchgeführte Studie zeigte jedoch, dass es eine bessere Erholung von gibt Salmonella typhimurium Y. Salmonella enteritidis Mit zunehmendem Alter von Wismutsulfitagar wird die Leistung von Serovaren nicht beeinträchtigt Typhi Y. Paratyphi B..
D'aoust empfiehlt, die Platten am 4. Tag der Kühlung zu verwenden, warnt jedoch davor, dass mit zunehmendem Alter des Mediums die Selektivität abnimmt und sich leichter Stämme entwickeln Proteus vulgaris.
Aus diesem Grund ist es für stark kontaminierte Proben wie Kot vorzuziehen, das frisch zubereitete Medium zu verwenden. Andernfalls am 4. Tag der Zubereitung verwenden. Andere Autoren empfehlen, die Platten am Tag nach ihrer Zubereitung im Kühlschrank aufzubewahren..
Gekühlte Teller müssen vor Gebrauch temperiert werden. Der pH-Wert des Mediums sollte 7,5 ± 0,2 betragen. Die Farbe des Rohmediums ist beige und das vorbereitete Medium ist grünlich-grau opaleszierend.
Zu den Proben, die in dieses Medium gepflanzt werden können, gehören Proben von Kot, Trinkwasser oder Abwasser und Lebensmitteln..
Um die Isolate zu verbessern, wird empfohlen, vor der Aussaat auf Wismutsulfit-Agar eine Voranreicherungsbehandlung mit Laktosebrühe und nach der Anreicherung mit Tetrathionatbrühe oder Cystin-Selenit-Brühe durchzuführen..
Die Platten werden 24 bis 48 Stunden bei 35 ° C ± 0,2 in Aerobiose inkubiert.
Die Kolonien von Salmonella Typhi Sie sind normalerweise innerhalb von 24 Stunden auf diesem Agar mit einem schwarzen Zentrum zu sehen und von einem hellgrünen Heiligenschein umgeben. Während sie in 48 Stunden aufgrund der Bildung von Schwefelwasserstoff vollständig schwarz werden.
Salmonella Paratyphi A. es präsentiert Kolonien mit variablen Eigenschaften. Nach 18 Stunden Inkubation können schwarze, grüne oder transparente Kolonien mit einem schleimigen Aussehen beobachtet werden. Während sie nach 48 Stunden vollständig schwarz sind und manchmal einen ausgeprägten metallischen Glanz haben..
S. Paratyphi A. neigt dazu, die Umgebung der Kolonie zu schwärzen.
Salmonella sp zeigen schwarze oder grünlich-graue Kolonien mit oder ohne metallischen Glanz und können die Umgebung schwärzen oder nicht.
Coliforme Stämme sind im Allgemeinen vollständig gehemmt, aber wenn sie wachsen, entwickeln sie sich als undurchsichtige grüne oder braune Kolonien ohne metallischen Glanz. Färben Sie das Medium nicht um die Kolonie herum.
-Sehr schwache Inokulate können Kolonien von verursachen Salmonella Typhi hellgrüne Farbe, unbemerkt und die Kultur wird als negativ gemeldet.
- Wismutsulfit-Agar kann die Erholung einiger Salmonella-Arten wie z S. sendai, S. berta, S. gallinarum, S. abortus-equi.
-Dieses Medium hemmt die meisten Arten der Gattung Shigella.
- S. Typhi und S. arizonae kann sehr ähnliche Kolonien geben.
-Coliforme, die H produzierenzweiS wie Proteus und Citrobacter produzieren Kolonien ähnlich denen von Salmonellen, daher ist es notwendig, biochemische Identifizierungstests durchzuführen.
-Es müssen gute Streifen gemacht werden, um isolierte Kolonien zu erhalten. Nur so können die typischen Merkmale von Kolonien der Gattung Salmonella beobachtet werden.
Für die Sterilitätskontrolle wird eine nicht inokulierte Platte bei 37 ° C inkubiert, es wird erwartet, dass es kein Wachstum oder keine Farbänderung gibt..
Zur Qualitätskontrolle sind bekannte Stämme wie:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Es wird erwartet, dass Escherichia coli Y. Shigella flexneri werden teilweise durch die Entwicklung von grünlich-braunen bzw. braunen Kolonien gehemmt. Während beide Salmonellen eine hervorragende Entwicklung mit schwarzen Kolonien mit metallischem Glanz haben müssen, und schließlich Enterococcus faecalis muss völlig gehemmt werden.
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