Das Sabouraud-Agar, Auch als Sabouraud-Dextrose-Agar bekannt, ist es ein festes Kulturmedium, das speziell für die Isolierung und Entwicklung von Pilzen wie Hefen, Schimmelpilzen und Dermatophyten angereichert ist..
Daher darf dieses Medium in einem mikrobiologischen Labor nicht fehlen, um das Vorhandensein pathogener oder opportunistischer Pilze aus klinischen oder nichtklinischen Proben zu untersuchen. Ebenso ist es auch ideal für das Wachstum von filamentösen Bakterien wie Streptomyces und Nocardias. Seine Verwendung ist sehr weit verbreitet, da es in der Mykologie von Mensch, Tier, Pflanze und Industrie eingesetzt werden kann.
Dieses Medium wurde 1896 von dem bekannten Dermatologen Raimond Sabouraud entwickelt, der zu einem weltbekannten Spezialisten für Erkrankungen der Kopfhaut wurde, die hauptsächlich durch Dermatophyten verursacht wurden..
Seine Schaffung war so wichtig, dass es seitdem verwendet wird und bis heute verwendet wird, wenn auch mit einigen Modifikationen.
Obwohl es speziell für Pilze ist, können Bakterien in diesem Medium wachsen. Daher ist bei Proben mit gemischter Flora die Einbeziehung von Antibiotika in ihre Herstellung erforderlich und hemmt somit das Wachstum der möglicherweise vorhandenen Bakterienflora..
Die Auswahl des Antibiotikums muss sorgfältig und unter Berücksichtigung der Art des zurückgewinnbaren Pilzes getroffen werden, da einige in Gegenwart bestimmter Substanzen gehemmt werden.
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Sabouraud-Dextrose-Agar ist ein Medium, das in seiner ursprünglichen Formulierung aufgrund seines sauren pH-Werts von 5,6 ± 0,2 schwach selektiv ist. Es können sich jedoch immer noch Bakterien entwickeln, hauptsächlich bei längeren Inkubationen.
Das Medium enthält Kaseinpepton und Pankreasverdauung von tierischem Gewebe, die die Kohlenstoff- und Stickstoffquelle für das Wachstum von Mikroorganismen darstellen..
Es enthält auch eine hohe Konzentration an Glukose, die als Energiequelle fungiert und das Wachstum von Pilzen über Bakterien fördert. Alles gemischt mit Agar-Agar, einer Komponente, die ihm die richtige Konsistenz verleiht..
Andererseits kann Sabouraud-Dextrose-Agar selektiv sein, wenn Antibiotika zugesetzt werden..
Mit Antibiotika ist es besonders nützlich bei Proben von Wunden, offenen Geschwüren oder Proben, bei denen der Verdacht auf eine starke bakterielle Kontamination besteht.
-Sabouraud-Agar mit Chloramphenicol: Ideal zur Rückgewinnung von Hefen und Fadenpilzen.
-Sabouraud-Agar mit Gentamicin und Chloramphenicol: Fast alle Fadenpilze und Hefen wachsen auf diesem Medium und hemmen eine große Anzahl von Bakterien, einschließlich Enterobacteriaceae, Pseudomonas und Staphylococcus.
-Sabouraud-Agar mit Cycloheximid: Es ist besonders nützlich für Proben aus der Haut oder den Atemwegen, solange der Verdacht auf dimorphe Pilze besteht.
Cycloheximid sollte mit Vorsicht angewendet werden. Obwohl es verwendet wird, um das Wachstum von nicht pathogenen oder Umweltpilzen und Hefen zu hemmen, die als Kontaminanten in einer Probe vorhanden sein können, hemmt es auch das Wachstum einiger Pilze wie z Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp und andere opportunistische Pilze.
-Sabouraud-Agar mit Chloramphenicol plus Cycloheximid: Wird hauptsächlich zur Isolierung von Dermatophyten und dimorphen Pilzen verwendet. Es hat den Nachteil, dass es einige Arten opportunistischer Pilze wie z Candida keine Albicans, Aspergillus, Zygomyceten oder C.. neoformans.
-Sabouraud-Agar mit Chloramphenicol, Streptomycin, Penicillin G und Cycloheximid: Es ist ideal für Proben, die extrem mit Bakterien und saprophytischen Pilzen kontaminiert sind, hat jedoch den Nachteil, dass es das Wachstum von hemmt Actinomyces und Nocardias, zusätzlich zu den oben genannten opportunistischen Pilzen.
Wenn Sie die Zutaten separat haben, können Sie sie wie folgt zubereiten:
Wiegen:
- 40 g Dextrose
- 10 g Pepton
- 15 g Agar-Agar
- 1000 ml destilliertes Wasser messen
Alle Zutaten werden gemischt, der pH wird auf 5,6 eingestellt. Die gelösten Stoffe werden durch Kochen gelöst, 20 ml des Mediums werden in Röhrchen von 25 x 150 mm ohne Rand und vorzugsweise mit einer Baumwollkappe verteilt..
Je nach Verfügbarkeit können auch andere Rohrgrößen verwendet werden.
Sie werden 10 Minuten bei einer Druckatmosphäre (121 ° C) autoklaviert. Die Autoklavierzeit sollte nicht überschritten werden. Beim Verlassen des Autoklaven werden die Röhren mit Hilfe eines Trägers geneigt, bis sie sich in einer Flötenspitze verfestigen..
Eine andere Möglichkeit besteht darin, die Zutaten durch Erhitzen bis zum Kochen aufzulösen. Im gleichen Kolben 10 Minuten autoklavieren und dann 20 ml in Petrischalen verteilen..
Wenn Sie ein Sabouraud-Dextrose-Agarmedium haben, das bereits alle Inhaltsstoffe enthält, wiegen Sie die vom Handelsunternehmen angegebene Menge für einen Liter Wasser. Die restlichen Schritte sind die gleichen wie oben beschrieben.
Wiegen:
- 20 g Dextrose
- 10 g Pepton
- 17 g Agar-Agar
- 1000 ml destilliertes Wasser messen
Alle Zutaten werden gemischt, der pH wird auf 6,9 eingestellt. Gehen Sie wie im vorherigen Fall vor.
Es gibt Handelshäuser, die das Medium mit allen Zutaten anbieten. In diesem Fall wiegen und vorbereiten wie auf dem Einsatz beschrieben..
- 500 mg Chloramphenicolbase wiegen
- Messen Sie 100 ml 95% iges Ethanol
- Mischen
Sabouraud-Dextrose-Agarmedium (Emmons) wird wie zuvor beschrieben hergestellt und zusätzlich für jeden Liter Medium vor dem Autoklavieren 10 ml Chloramphenicol-Stammlösung zugegeben..
- 5 g Cycloheximid wiegen
- Messen Sie 100 ml Aceton
- Mischen
Sabouraud-Dextrose-Agarmedium (Emmons) wird wie zuvor beschrieben hergestellt und zusätzlich für jeden Liter Medium vor dem Autoklavieren 10 ml Cycloheximid-Stammlösung zugegeben..
Sabouraud-Dextrose-Agarmedium (Emmons) wird wie bereits beschrieben hergestellt und zusätzlich für jeden Liter Medium vor dem Autoklavieren 10 ml Chloramphenicol-Stammlösung und 10 ml Cycloheximid-Stammlösung zugegeben..
20.000 bis 60.000 Einheiten Penicillin pro Liter Medium.
30 mg Streptomycin pro Liter Medium.
Beide müssen eingearbeitet werden, nachdem das Medium autoklaviert und leicht abgekühlt wurde (50-55 ° C)..
0,04 g Neomycin pro Liter Medium.
0,04 g Gentamicin pro Liter Medium.
Aus Sicherheitsgründen wird Sabouraud-Dextrose-Agar lieber in keilförmigen Röhrchen (im Flötenschnabel geneigt) als in Petrischalen ausgesät, um ein Verteilen und Einatmen von Sporen zu vermeiden.
Es ist wichtig, dass Sabouraud-Agarröhrchen mit Baumwolle und nicht mit einem Schraubverschluss bedeckt sind, da gezeigt wurde, dass semi-anaerobe Bedingungen beispielsweise bei einigen Stämmen die Sporenbildung hemmen Coccidioides immitis. Außerdem sind die meisten Pilze aerob..
Bei Verwendung eines Schraubverschlusses nicht hermetisch schließen.
Die vorbereiteten Medien sollten einer Qualitätskontrolle unterzogen werden, um ihre ordnungsgemäße Funktion zu überprüfen. Hierzu werden bestimmte Kontrollstämme ausgesät.
Für Sabouraud-Dextrose-Agar mit Chloramphenicol wurden ATCC-Stämme von Candida albicans, das muss ein ausgezeichnetes Wachstum haben. Eine andere Platte wird mit Stämmen beimpft Escherichia coli, muss vollständig gehemmt werden.
Eine nicht inokulierte Platte wird ebenfalls inkubiert, in der keine Mikroorganismen wachsen sollten..
Für Sabouraud-Dextrose-Agar mit Chloramphenicol und Cycloheximid wurden Stämme von Trichophyton-Mentagrophyten, sollte sich gut entwickeln. Eine andere Platte wird mit einem Stamm von inokuliert Aspergillus flavus, in dem es wenig oder kein Wachstum geben darf. Zusätzlich wird eine nicht inokulierte Platte inkubiert, um ihre Sterilität zu demonstrieren..
Für Sabouraud-Dextrose-Agar mit Cycloheximid wurden Stämme von Candida albicans, Trichophyton rubrum oder Microsporum canis, das muss gutes Wachstum zeigen.
Ebenso eine Belastung von Aspergillus flavus, zeigt wenig oder kein Wachstum. Zum Schluss eine nicht inokulierte Platte zur Sterilitätskontrolle inkubieren..
Klassischer Sabouraud-Dextrose-Agar enthält 4 Gramm Dextrose und eignet sich hervorragend als primäres Isolationsmedium, da er die charakteristische Morphologie jedes Pilzes zeigt..
Es eignet sich auch hervorragend zum Nachweis der Pigmentproduktion. Es ist jedoch nicht das am besten geeignete Mittel zur Beobachtung der Sporulation..
Es wird auch nicht zum Wachsen empfohlen Blastomyces dermatitidis, was durch die hohe Konzentration an vorhandener Glucose gehemmt wird.
Andererseits müssen bei der Kultivierung bestimmte Überlegungen berücksichtigt werden.
Einige Pilze wachsen am besten bei Raumtemperatur, wie Schimmelpilze, andere wachsen erfolgreich bei 37 ° C, wie einige Hefen, und andere können bei beiden Temperaturen wachsen (dimorphe Pilze).
Aus diesem Grund ist es manchmal erforderlich, mehrere Sabouraud-Agarplatten für dieselbe Probe zu verwenden, da häufig eine doppelte Aussaat durchgeführt wird, um eine Platte bei Raumtemperatur und eine andere bei 37 ° C zu inkubieren..
Beispielsweise, Sporothrix schenckii es wird in zwei Platten gesät; Einer wird bei Raumtemperatur inkubiert, um die Schimmelpilzphase zu erhalten, und der andere wird bei 37 ° C inkubiert, um die Hefephase zu erhalten. In letzterem Fall ist es jedoch erforderlich, dem Medium 5% Blut zuzusetzen.
In anderen Fällen, wie beispielsweise bei Mycetomproben, werden zwei Sabouraud-Agarplatten ausgesät, eine mit Chloramphenicol und die andere mit Cycloheximid. Der erste ermöglicht das Wachstum von Erregern von Mycetomen pilzlichen Ursprungs (Eumycetoma) und der zweiten Erreger von Mycetomen bakteriellen Ursprungs wie Actinomycetomen..
Von Emmons modifizierter Sabouraud-Dextrose-Agar enthält 2 g Dextrose und wird nicht nur zur Isolierung, sondern auch zur Sporulation und Konservierung von Pilzen verwendet.
In diesem Medium, wenn Stämme von Blastomyces dermatitidis.
Um Pilzkulturen zu konservieren, können sie im Kühlschrank (2-8 ° C) aufbewahrt werden. Die Konservierungszeit kann zwischen 2 und 8 Wochen variieren. Nach dieser Zeit müssen sie subkultiviert werden, um den Vorgang zu wiederholen..
Einige Pilze halten sich am besten bei Raumtemperatur, wie z Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum Y. Microsporum audounii.
Die Aufrechterhaltung des Stammes kann verlängert werden, um Pleomorphismus zu vermeiden, wenn die Dextrose vollständig aus dem Agar entfernt wird und wenn die Menge an Agar im Medium verringert wird, um Trockenheit zu vermeiden.
Zur Identifizierung einiger Fadenpilze ist es notwendig, Mikrokulturen unter Verwendung von Sabouraud-Agar oder anderen speziellen Mitteln durchzuführen, um die Strukturen der sexuellen und asexuellen Fortpflanzung zu beobachten..
Es wird hauptsächlich zur Diagnose von Pilzkrankheiten verwendet, insbesondere solchen, die die Haut und ihre Anhaftungen (Haare und Nägel) betreffen..
Die Proben können Sekrete, Exsudate, Haut, Haare, Nägel, Auswurf, Liquor oder Urin sein. Häufig isolierte Krankheitserreger sind Dermatophyten, Pilze, die subkutane und systemische Mykosen verursachen..
Tiere sind häufig von Pilzinfektionen betroffen, daher ist Sabouraud-Agar in der Tiermykologie genauso nützlich wie beim Menschen..
Beispielsweise können Dermatophyten häufig Tiere betreffen. Dies ist der Fall von Microsporum canis var distortum, Es infiziert häufig Hunde, Katzen, Pferde, Schweine und Affen. gleichfalls, Microsporum gypseum infiziert Hunde, Katzen und Vieh.
Vögel wie Hühner, Hähne und Hühner sind betroffen von Microsporum gallinae.
Andere Pilze wie Zymonema farciminosum, Sie sind auch die Ursache von Krankheiten bei Tieren, hauptsächlich Pferden, Maultieren und Eseln, und verursachen signifikante Entzündungen in den Lymphgefäßen..
Sporothrix schenkii und Histoplasma capsulatum betreffen Haustiere und Menschen.
Viele pathogene oder opportunistische Pilze können sich zu einem bestimmten Zeitpunkt in einer bestimmten Umgebung konzentrieren, insbesondere in Operationssälen und Intensivstationen von Kliniken und Krankenhäusern. Daher ist es notwendig, eine Kontrolle über sie durchzuführen.
Andere gefährdete Räume sind Bibliotheken und alte Gebäude, die durch die Konzentration von Umweltpilzen beeinträchtigt werden können.
In Umweltstudien wird Sabouraud-Dextrose-Agar zur Isolierung von Pilzen verwendet..
Sabouraud-Dextrose-Agar darf nicht fehlen, um unter anderem kontaminierende Pilze bei der Herstellung von Kosmetika, Lebensmitteln, Getränken, Leder und Textilien zu untersuchen..
Pflanzen leiden auch an Krankheiten, die durch Pilze verursacht werden und verschiedene Pflanzenteile betreffen, die sogar die Ernte beenden und große Verluste in der Landwirtschaft verursachen können..
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