Das Gallen-Esculin-Agar Es ist ein selektives und differenzielles festes Kulturmedium. Es wird als diagnostischer Test verwendet, um die Fähigkeit eines bestimmten Mikroorganismus zu bestimmen, in einem Medium zu wachsen, das Galle enthält, und um das Glucosid Esculin in Esculetin und Glucose zu zerlegen..
Dieser diagnostische Test wird verwendet, um Arten der Gattung Streptococcus der Gruppe D (Gallen-Esculin-positiv) von anderen Streptococcus-Gruppen zu unterscheiden, die negativ auf diesen Test reagieren..
Es sollte beachtet werden, dass einige Streptokokken der Viridans-Gruppe Esculin hydrolysieren können, jedoch nicht in der Lage sind, in Gegenwart von Galle in einer Konzentration von 40% zu wachsen, weshalb in diesem Medium die Reaktion für diese Gruppe negativ ist.
Andererseits ist das Gallen-Esculin-Medium auch zur Diagnose von nützlich Listeria monocytogenes oder Arten von Aerococcus sp, da diese Mikroorganismen Gallen-Esculin-positiv sind.
Esculin-Gallenagar besteht aus Pepton, Fleischextrakt, Ochsengalle, Esculin, Eisencitrat, Agar und destilliertem Wasser. Einige Handelshäuser enthalten Natriumazid in der Zusammensetzung des Mediums.
Das Medium kann im Labor hergestellt werden, wenn Sie alle Verbindungen separat haben, oder es kann aus dem handelsüblichen dehydrierten Medium hergestellt werden..
Artikelverzeichnis
Das Gallen-Esculin-Medium enthält Peptonen und Fleischextrakt, beide Verbindungen liefern die notwendigen Nährstoffe für das Wachstum von Mikroorganismen.
Es enthält auch Esculin; Diese Verbindung ist ein Glucosid, das durch Vereinigung eines einfachen Monosaccharids (Glucose) mit einer Verbindung namens 6,7-Dihydroxycumarin oder Esculetin (Aglucon) gebildet wird, die durch eine Acetal- oder Glucosidbindung verbunden ist.
Der Test basiert auf dem Nachweis, ob das Bakterium Esculin hydrolysieren kann. In diesem Fall zerfällt das Esculin in Esculetin und Glucose. Esculetina reagiert mit dem im Medium vorhandenen Eisen und bildet eine dunkelbraune, fast schwarze Verbindung.
Dies bedeutet, dass Eisen (III) -citrat als Reaktionsentwickler wirkt. Diese Eigenschaft macht Gallen-Esculin-Agar zu einem Differenzialmedium..
Galle ist ihrerseits ein Inhibitor, der das Wachstum einiger Mikroorganismen verhindert. Daher müssen die Bakterien vor der Spaltung des Esculins in der Lage sein, in Gegenwart von Galle zu wachsen. Daher wird dieses Medium als selektiv angesehen.
Die Bakterien, die sich in dieser Umgebung entwickeln können, sind hauptsächlich diejenigen, die in der Darmumgebung leben.
In diesem Sinne fügen einige kommerzielle Unternehmen dem Medium Natriumazid hinzu, um das Wachstum von enterischen gramnegativen Bazillen weiter zu hemmen und die Selektivität des Mediums für das Wachstum von Streptococcus zu erhöhen..
Schließlich gibt der Agar dem Medium die feste Konsistenz und Wasser ist das Lösungsmittel der Verbindungen..
Wiegen:
5 g Peptonen
3 g Fleischextrakt
40 g Rindergalle
1 g Esculin
0,5 g Eisencitrat
15 g Agar
1000 ml destilliertes Wasser
Bei Zugabe von Natriumazid 0,25 g / Liter wiegen und zu der Mischung geben.
Lösen Sie die Komponenten in einem Liter destilliertem Wasser und erhitzen Sie sie, bis sich die Verbindungen vollständig aufgelöst haben. 5 ml in Reagenzgläser mit 16 x 125 mm Schraubverschluss verteilen. Autoklav bei 121 ° C, 15 Pfund Druck für 15 Minuten.
Nehmen Sie es aus dem Autoklaven und kippen Sie die Röhrchen auf einen Träger, damit sich der Agar in einem breiten Flötenschnabel verfestigt.
Bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahren. Vor der Aussaat auf Raumtemperatur bringen.
Es können auch Gallen-Esculin-Agarplatten hergestellt werden; In diesem Fall wird die gesamte Mischung in einem Kolben autoklaviert und anschließend in sterilen Petrischalen verteilt. Sie werden erstarren gelassen und im Kühlschrank aufbewahrt..
Der pH-Wert des Mediums muss 6,6 ± 0,2 betragen.
Wiegen Sie die in der Beilage angegebene Menge. Dies kann von Geschäftshaus zu Geschäftshaus variieren. Gehen Sie anschließend wie oben beschrieben vor.
Der pH-Wert des Mediums sollte 6,6 ± 0,2 betragen. Die Farbe des dehydrierten Mediums ist hellbeige und das vorbereitete Medium ist dunkler Bernstein.
Das Gallen-Esculin-Medium wird hauptsächlich verwendet, um Streptokokken der Gruppe D (Gallen-Esculin-positiv) von den übrigen Streptokokken-Gruppen (Gallen-Esculin-negativ) zu unterscheiden..
Die Kombination des Hypersalzbrühe-Wachstumstests mit dem Gallen-Esculin-Test kann verwendet werden, um eine spezielle Gruppe von Streptokokken der Gruppe D zu identifizieren, die Enterococcus genannt wird.
Diese spezielle Gruppe von Streptokokken gehört zur Gruppe D der genannten Gattung und ist in der Lage, Esculin in Gegenwart von Galle zu hydrolysieren, ebenso wie die übrigen Mitglieder der Gruppe D, aber sie können sich auch in einem hypersalzenen Medium (BHI mit) entwickeln Chlorid von 6,5% Natrium), eine Eigenschaft, die den Unterschied macht.
Daher werden Streptokokken, die Esculin-Galle hydrolysieren, aber nicht in hypersalzter Brühe wachsen, als Nicht-Enterokokken-Streptokokken der Gruppe D bezeichnet..
Inokulieren Sie das Medium vorzugsweise aus einer reinen 24-Stunden-Brühe von Todd-Hewitt.
2 Tropfen mit einer Pasteurpipette auf die Oberfläche des Mediums geben und mit einer Platinschleife im Medium verteilen..
48 Stunden bei 35 ° C inkubieren, während die Inkubationszeit erfüllt ist, kann überwacht werden, um festzustellen, ob eine positive Reaktion vorliegt. Wenn die Reaktion am Ende der Zeit negativ bleibt, kann sie bis zu 72 Stunden inkubiert werden.
Positive Reaktion: Auftreten einer dunkelbraunen, fast schwarzen Farbe im Flötenschnabel (im Fall des Röhrentests) oder Schwärzung des Agars um die Kolonien (im Fall des Plattentests).
Negative Reaktion: In weniger als der Hälfte des Röhrchens tritt nach 72-stündiger Inkubation keine Schwärzung des Mediums oder des Schwarzes auf. Andererseits sollte das Bakterienwachstum im Medium ohne das Auftreten der schwarzen Farbe als negativer Test angesehen werden..
Um die Qualität des Mediums zu bewerten, wird eine Belastung von Enterococcus faecalis ATCC 29212 als positive Kontrolle und ein Streptocococus-Stamm, der nicht zur Gruppe D gehört, als negative Kontrolle.
-Medien, die kein Natriumazid enthalten, ermöglichen das Wachstum von enterischen gramnegativen Stäbchen. Einige von ihnen können die Mitte schwärzen.
- Einige Handelshäuser fügen eine geringe Konzentration an Galle (10%) hinzu, und aus diesem Grund können sich einige Streptokokken, die nicht zur Gruppe D gehören, im Medium entwickeln und Esculin hydrolysieren, was zu Interpretationsfehlern führen kann..
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