Das Malonatbrühe Es ist das flüssige Kulturmedium, das für den diagnostischen Test (Malonat-Test) verwendet wird, um einige Gattungen der Familie der Enterobacteriaceae zu unterscheiden. Es wurde 1933 von Leifson hergestellt und später von Ewing modifiziert, der der ursprünglichen Formel eine kleine Menge Dextrose und Hefeextrakt hinzufügte..
Das Medium besteht derzeit aus Hefeextrakt, Ammoniumsulfat, Dikaliumphosphat, Monokaliumphosphat, Natriumchlorid, Natriummalonat, Dextrose und Bromthymolblau. Dieser Test ist im Allgemeinen in der biochemischen Identifizierungsbatterie für Enterobacteriaceae enthalten und hilft bei der Unterscheidung bestimmter Gattungen und Arten..
Der Malonat-Test basiert hauptsächlich auf der Fähigkeit einiger Mikroorganismen, Natriummalonat als einzige Kohlenstoffquelle und Ammoniumsulfat als Stickstoffquelle zu verwenden..
Der Malonat-Test ist normalerweise bei einigen Arten der Gattungen Enterobacter, Klebsiella und Citrobacter positiv. Während die meisten Arten der Gattungen Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus und Providencia negativ reagieren.
Artikelverzeichnis
Der Malonat-Test besteht darin, diejenigen Bakterien zu zeigen, die Natriummalonat als einzige Kohlenstoffquelle und Ammoniumsulfat als Stickstoffquelle verwenden können..
Die meisten Enterobacteriaceae, die kein Malonat verwenden, können in diesem Medium wachsen und nehmen Dextrose und Hefeextrakt als Nährstoffe..
In diesem Fall wird jedem Versuch der Alkalisierung durch Verwendung von Peptonen durch die Produktion von Säuren entgegengewirkt, die durch die Fermentation von Dextrose erzeugt werden. Ebenso wirken Dikalium- und Monokaliumphosphate als Puffer und halten den pH-Wert bei 6,7.
Wenn der Test negativ ist, bleibt die Brühe daher in der ursprünglichen Farbe (grün). In seltenen Fällen kann das Medium aufgrund der Dextrose-Fermentation sauer werden. Ohne die Verwendung der Peptonen und des pH-Indikators würde sich die Farbe des Mediums in Richtung Gelb ändern. Dazu muss der pH-Wert auf 6 fallen.
Wenn dieser Test positiv ist, wird gesagt, dass der Mikroorganismus Malonat und Ammoniumsulfat als Kohlenstoff- bzw. Stickstoffquellen verwendete, ohne die anderen Komponenten zu verwenden..
In diesem Fall wird das Medium aufgrund der Freisetzung von Natrium und der daraus resultierenden Bildung von NaOH alkalisch. In diesem Sinne ändert der pH-Indikator (Bromthymolblau) die Farbe des Mediums von grün nach blau, wenn der pH-Wert gleich oder größer als 7,6 ist. Blau kann hell oder intensiv sein (preußisches Blau).
Schließlich behält Natriumchlorid die Osmolarität des Mediums bei und Wasser ist das Verdünnungsmittel aller Komponenten..
Gleichfarbige Brühe (grün) - Negativer Test
Gelbe Brühe: negativer Test
Hell- oder tiefblaue Brühe: Test positiv
Es gibt eine Variante namens Phenylalanin-Malonat-Brühe, auch Shaw- und Clarke-Medium genannt. In diesem Fall können zwei Tests analysiert werden, die Verwendung von Malonat als Kohlenstoffquelle und die Herstellung von Brenztraubensäure aus Phenylalanin..
Die Anzahl der Gramm, die in der Beilage des ausgewählten Handelsunternehmens angegeben sind, wird gewogen (sie kann von einem zum anderen variieren). Die gewogenen Gramm werden in einem Liter destilliertem Wasser suspendiert. Leicht erhitzen, bis sich alles vollständig aufgelöst hat. Verteilen Sie 3 ml des Mediums in 13/100 Reagenzgläsern mit Baumwollkappen..
Im Autoklaven 15 bis 20 Minuten bei 121 ° C sterilisieren.
Vor Gebrauch abkühlen lassen. Wenn sie nicht sofort verwendet werden sollen, lagern Sie sie bis zur Verwendung im Kühlschrank. Bringen Sie die Brühe vor dem Inokulieren auf Raumtemperatur.
Der pH-Wert des Mediums sollte 6,7 ± 0,2 betragen. Die Farbe des vorbereiteten Mediums ist flaschengrün.
11 g des dehydrierten Mediums werden abgewogen und in 1 Liter destilliertem Wasser gelöst. Der Rest der Zubereitung ist der gleiche wie zuvor beschrieben.
Es kann auch hergestellt werden, indem 2 g / l Phenylalanin zu dem Malonatbrühenmedium gegeben werden, bevor es sterilisiert wird..
Es wird als Teil der Reihe biochemischer Tests verwendet, die zur Identifizierung von Bakterien der Enterobacteriaceae-Familie zusammengestellt werden.
Hilft bei der Unterscheidung zwischen:
-Die Gattungen Klebsiella und Enterobacter (+) der Gattungen Escherichia und Serratia (-).
-Die Arten von Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp Salami und Salmonella enterica ssp diarizonae (+), der Art Salmonella enterica ssp enterica (-).
-Von der Gattung Klebsiella meist (+) der Gattung Actinobacillus (-).
-Es kann manchmal hilfreich sein, Gattungen und Arten von Bakterien zu unterscheiden, die nicht zur Familie der Enterobacteriaceae gehören, z. B. zwischen nicht fermentierenden gramnegativen Stäbchen. Alcaligenes faecalis (+) und Acinetobacter sp (-).
Unter einem Feuerzeug wird ein Teil eines reinen Kölns mit einem ordnungsgemäß sterilisierten und gekühlten Platingriff entnommen. Die entnommene Probe (leichtes Inokulum) wird in der Malonatbrühe gelöst. Inkubieren Sie mit lockerem Deckel in Aerobiose bei 35 ° C ± 0,2 für 24 bis 48 Stunden.
Malonatbrühe kann auch aus einer 18-24-stündigen Kultur in Trypticase-Soja-Brühe inokuliert werden. In diesem Fall werden 0,01 ml mit einer sterilen Pipette entnommen und die Malonatbrühe beimpft. Inkubieren Sie mit lockerem Deckel in Aerobiose bei 35 ° C ± 0,2 für 24 bis 48 Stunden.
Am Ende der Zeit werden die Ergebnisse interpretiert. Jede Spur von blauer Farbe nach 48 Stunden Inkubation sollte als positiv angesehen werden. Der Test sollte erst nach Ablauf der 48-stündigen Inkubationszeit als negativ interpretiert werden..
Bei Verwendung der Phenylalanin-Malonat-Bouillon-Variante wird das Malonat zuerst interpretiert und dann werden 5 Tropfen 1 N HCl und 3-5 Tropfen 8% Eisenchlorid zugegeben. Eine dunkelgrüne Farbe wird als positiver Test für Phenylalanin interpretiert. Wenn das Medium im Gegenteil hellblau wird, ist der Test negativ für Phenylalanin..
Um die Sterilitätskontrolle des Mediums durchzuführen, sollten eine oder zwei Brühen 24 Stunden lang bei 35 ° C ± 0,2 inkubiert werden. Nach dieser Zeit sollte es keine Trübung oder Farbveränderung mehr geben.
Bekannte oder zertifizierte Stämme können zur Qualitätskontrolle verwendet werden, wie z. Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 und Escherichia coli ATCC 25922.
Die erwarteten Ergebnisse sind:
Verwenden Sie keine Brühe, die Trübung, Niederschläge, Farbveränderungen oder Anzeichen einer Verschlechterung aufweist.
Bisher hat noch niemand einen Kommentar zu diesem Artikel abgegeben.