Das TSI-Agar o Triple Sugar Iron Agar ist ein festes Kulturmedium, das als biochemischer Test dient, um die anfängliche Identifizierung von gramnegativen Bazillen zu steuern. Es basiert auf der Darstellung der Fermentation der vorhandenen Zucker und der Produktion von Schwefelwasserstoff und Gas.
Seine Zusammensetzung und Basis ist dem Kligler-Eisentest sehr ähnlich, mit dem Unterschied, dass dieser nur Glucose und Lactose enthält. Andererseits enthält Dreifachzucker-Eisenagar - wie der Name schon sagt - drei fermentierbare Kohlenhydrate: Glucose, Lactose und Saccharose..
Darüber hinaus enthält das TSI-Medium vier Proteinderivate, die es zu einem sehr nahrhaften Agar machen: Hefeextrakt, Fleischextrakt, Pepton und Proteosepepton. Enthält auch Eisenammoniumsulfat, Natriumthiosulfat, Natriumchlorid, Phenolrot und Agar.
Die Unfähigkeit eines Mikroorganismus, die im Medium vorhandene Glucose zu fermentieren, schließt sie sofort von der Zugehörigkeit zur Familie der Enterobacteriaceae aus. Daher ist dieser Test wichtig, um zu entscheiden, welchen Identifizierungsweg zur Bestimmung der Gattung und Art gewählt werden soll..
Jedes Labor entscheidet, ob mit TSI-Agar oder mit Kligler-Eisenagar gearbeitet wird..
Artikelverzeichnis
Jede der Verbindungen erfüllt eine Funktion innerhalb des Mediums.
Natriumchlorid ist notwendig, um das osmotische Gleichgewicht des Mediums aufrechtzuerhalten. Während der Agar ihm die feste Konsistenz gibt.
Der pH-Wert des hergestellten Mediums ist bei 7,3 ausgeglichen und der pH-Indikator (Phenolrot) wird unter 6,8 gelb. Dies bedeutet, dass kleine Mengen an Säuren, die durch die Fermentation von Zuckern entstehen, das Medium von rot-orange nach gelb umwandeln..
Wenn keine Fermentation stattfindet, wird das Medium unter Verwendung von Peptonen alkalisiert, wobei es von rot-orange zu stark rot wechselt.
Wenn Bakterien die im TSI-Agar vorhandenen Proteine metabolisieren, entstehen Amine, die das Medium alkalisieren (hauptsächlich auf abgeschrägter Ebene), da die Reaktion Sauerstoff erfordert. Amine färben die Lünette hellrot.
Dies hängt jedoch von der Fähigkeit der Bakterien ab, Kohlenhydrate zu fermentieren oder nicht..
Die Untersuchung der Fermentation von Zuckern kann mehrere Bilder ergeben und jedes wird unterschiedlich interpretiert. Die Testinterpretation unterteilt Mikroorganismen in drei Kategorien: Glucose-Nichtfermenter, Lactose-Nichtfermenter und Lactose / Saccharose-Fermenter..
Es ist zu beachten, dass die Menge an Glucose im Medium begrenzt ist, während die Konzentration an Lactose und Saccharose zehnmal höher ist..
Bakterien der Enterobacteriaceae-Familie und andere glukosefermentierende Mikroorganismen beginnen, diesen Zucker zu fermentieren, da er das einfachste Kohlenhydrat für Energie ist..
Andererseits sind Laktose und Saccharose komplexe Kohlenhydrate, die abgebaut und in Glukose umgewandelt werden müssen, damit sie in den Embden-Meyerhof-Zyklus gelangen können..
Wenn der beimpfte Mikroorganismus nicht in der Lage ist, Glukose zu fermentieren, kann er viel weniger andere Kohlenhydrate fermentieren. Daher werden hier keine Säuren gebildet, aber aufgrund der Verwendung von Peptonen bilden sich Amine in der Abschrägung.
In diesem Fall färbt sich die Lünette stärker rot und der Boden des Röhrchens kann unverändert bleiben oder es kann auch alkalisch werden, so dass das gesamte Röhrchen rot bleibt..
Interpretation: K / K bedeutet alkalische Abschrägung / alkalischer oder neutraler Boden
Im Bild am Anfang des Artikels sehen Sie das Bild von Röhre D..
Dieses Ergebnis zeigt, dass der Mikroorganismus nicht zur Familie der Enterobacteriaceae gehört..
Wenn die Bakterien in der Lage sind, Glukose, aber keine Laktose oder Saccharose zu fermentieren, geschieht Folgendes:
Die Bakterien verbrauchen nach etwa 6 bis 8 Stunden die gesamte vorhandene Glukose und können sowohl die Abschrägung als auch den Block ansäuern. Das heißt, der Agar ist vollständig gelb geworden. Wenn jedoch die Glukose aufgebraucht ist und Laktose und Saccharose nicht mehr verwendet werden können, beginnen die Bakterien mit dem Metabolismus von Proteinen.
Diese Reaktion benötigt Sauerstoff, daher erfolgt der Abbau von Peptonen an der Oberfläche (Abschrägung). Die erzeugten Amine alkalisieren die Lünette und färben sich von gelb nach rot. Diese Reaktion zeigt sich nach 18 bis 24 Stunden Inkubation..
Interpretation: K / A bedeutet alkalische Abschrägung und Säurewatte.
Im Bild am Anfang des Artikels sehen Sie das Bild von Rohr B..
Mikroorganismen, die Laktose und Saccharose fermentieren können, können offensichtlich Glukose fermentieren. Nachdem die im Medium vorhandene Mindestmenge an Glucose erschöpft ist, beginnt das gebildete Pyruvat während des aeroben Krebszyklus zu Säuren zu metabolisieren, und im Zeitraum von 8 bis 12 Stunden ist das gesamte Medium gelb.
Wenn die Bakterien in der Lage sind, Laktose oder Saccharose abzubauen, werden weiterhin Säuren produziert und nach 18 bis 24 Stunden vergilbt das gesamte Röhrchen - Fase und Stopfen - weiter.
Es ist zu beachten, dass die Verwendung von Glucose auf zwei Arten erfolgt: eine aerob am Abschrägung des Röhrchens und die andere anaerob am Boden des Röhrchens..
Interpretation: A / A bedeutet Säurefase / Säureboden. Kann oder kann nicht Gas präsentieren.
Im Bild am Anfang des Artikels sehen Sie das Bild von Röhre A..
Einige Mikroorganismen können während der Fermentation von Zuckern Gas produzieren. Das Gas wird im Rohr durch den Druck angezeigt, den es innerhalb des Agars ausübt. Der Druck verursacht die Bildung von Blasen oder die Verdrängung des Agars. Manchmal kann die Gasbildung das Medium brechen.
Es ist wichtig, dass bei der Aussaat des TSI-Mediums die Punktion sauber durch die Mitte des Agars erfolgt, bis sie den Boden erreicht. Wenn der Einstich in Richtung der Rohrwände umgeleitet wird, kann dies zu falsch positiven Ergebnissen bei der Erzeugung des Gases führen, da es durch den falsch geformten Kanal entweicht.
Die Gasproduktion sowie die Reaktionen, die in der Agarfase auftreten, benötigen Sauerstoff. Daher wird empfohlen, das Rohr mit einem Baumwollstopfen abzudecken. Wenn eine Bakelitkappe verwendet wird, sollte diese nicht vollständig dicht sein..
Die Gasproduktion wird als positiv (+) oder negativ (-) angegeben..
Bakterien, die Schwefelwasserstoff (farbloses Gas) produzieren können, nehmen den Schwefel aus dem im Medium vorhandenen Natriumthiosulfat auf. Sobald der H.zweiS reagiert mit Eisenammoniumsulfat unter Bildung von Eisensulfid (deutlich sichtbarer schwarzer Niederschlag).
Die Produktion von H.zweiS wird als positiv (+) oder negativ (-) angegeben..
Im Bild am Anfang des Artikels sehen Sie das Bild von Röhre C..
62,5 g des dehydrierten Dreifachzucker-Eisenagar-Mediums (TSI) werden gewogen und in einem Liter destilliertem Wasser gelöst..
Erhitzen, bis sich der Agar vollständig aufgelöst hat. Eine Minute kochen lassen, dabei häufig umrühren. Verteilen Sie 4 ml des Mediums in 13/100 Reagenzgläsern mit Baumwollkappen.
Im Autoklaven 15 Minuten bei 121 ° C sterilisieren. Aus dem Autoklaven nehmen und schräg ruhen lassen. Es muss darauf geachtet werden, dass sowohl die Basis als auch die Lünette den gleichen Abstand haben.
Im Kühlschrank bei 2-8 ° C lagern. Vor der Aussaat des Bakterienstamms erwärmen lassen.
Die Farbe des dehydrierten Mediums ist hellbeige und das vorbereitete Medium ist rot-orange.
Der End-pH des hergestellten Mediums beträgt 7,3 ± 0,2.
Der TSI-Test ist auf mikrobiologischer Laborebene weit verbreitet. Dieser Test ist wichtig, um die Art des Tests zu bestimmen, der angewendet werden muss, um die Identifizierung der Gattung und Art zu erreichen. Durch die gute Ausführung und Interpretation können Material und Arbeit gespart werden.
Wenn das Ergebnis ein TSI K / K ist und der Cytochromoxidasetest positiv ist, ist bekannt, dass Tests zur Identifizierung nicht fermentierender gramnegativer Stäbchen wie Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia und anderer Gattungen verwendet werden sollten. Wenn es Oxidase-negativ ist, orientiert es sich an den Gattungen Acinetobacter, Stenotrophomonas usw..
Wenn andererseits ein TSI A / A oder K / A erhalten wird und der Cytochromoxidasetest negativ ist, werden wir sicher sein, dass es sich um einen Mikroorganismus handelt, der zur Familie der Enterobacteriaceae gehört, je mehr Nitrate zu Nitriten reduziert werden. In diesem Fall konzentriert sich der Identifizierungsweg auf spezifische Tests für diese Gruppe von Bakterien..
Wenn andererseits ein K / A- oder A / A-Bild erhalten wird und der Cytochromoxidasetest positiv ist, zielen die zusätzlich zusammenzusetzenden Tests auf die Identifizierung fermentierender Stämme ab, die nicht zur Familie der Enterobacteriaceae gehören, wie z als: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio und Pasteurella.
Ein TSI mit Schwefelwasserstoff, Oxidase-negativ, wird die Identifizierung der folgenden Gattungen der Enterobacteriaceae-Familie leiten: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella oder Salmonella.
Ein TSI mit wenig oder mäßigem Schwefelwasserstoff in der alkalischen Abschrägung mit alkalischem Hintergrund und positiver Oxidase wird die Verwendung von Tests zur Identifizierung von nicht fermentierenden gramnegativen Bazillen, die H produzieren, leitenzweiJa, genau wie Shewanella putrefaciens.
Schließlich kann der TSI zur Untersuchung der Schwefelwasserstoffproduktion in grampositiven Bazillen verwendet werden, insbesondere wenn der Verdacht besteht Erysipelothrix rhusiopathiae.
Das TSI-Medium muss mit reinen Kolonien beimpft werden, die in primären oder selektiven Kulturen isoliert wurden. Wenn die Kolonie aus selektiven Medien entnommen wird, die mit Proben mit gemischter Flora besät wurden, sollte darauf geachtet werden, nur von der Oberfläche zu entnehmen, da im unteren Teil der Kolonie lebensfähige Stämme vorhanden sein können, die in diesem Medium gehemmt sind..
Daher sollte die Schleife niemals auf einem selektiven Medium gekühlt werden, um später die Kolonie zu entnehmen und ein TSI-Medium zu inokulieren..
Die Aussaat erfolgt mit einer geraden Schlaufe oder Nadel. Es wird eine Punktion durchgeführt, wobei darauf geachtet wird, dass sie sich bis zum Boden in der Mitte der Mitte befindet. Anschließend wird die Aussaat durch Inokulieren der Oberfläche im Zickzack beendet. Machen Sie keine zwei Einstiche.
18-24 Stunden bei 37 ° C in Aerobiose inkubieren. Interpretiere in dieser Zeit weder vorher noch nachher.
Der TSI-Test sollte innerhalb von 18 bis 24 Stunden nach der Inkubation abgelesen werden. Ein Messwert vor dieser Zeit kann ein falsches Positiv für die A / A-Fermentation ergeben. Während ein Messwert nach dieser Zeit aufgrund des Verbrauchs von Peptonen, die das Medium alkalisieren, zu einem falsch negativen Bild eines Nichtfermenters führen kann..
Bisher hat noch niemand einen Kommentar zu diesem Artikel abgegeben.