Das Trypticasein Soja-Agar oder Trypticase-Soja-Agar ist ein festes, nicht selektives und nahrhaftes Kulturmedium. Es wird durch die Buchstaben TSA für sein Akronym in Englisch Trypticase Soy Agar bezeichnet. Es besteht aus Triptein, Sojapepton, Natriumchlorid und Agar-Agar.
Aufgrund seiner hohen Nährkraft ist es ideal für die Kultivierung von mäßig anspruchsvollen und nicht anspruchsvollen Mikroorganismen. Das Medium ohne zusätzliche Ergänzungen wird für Primärkulturen nicht empfohlen, ist jedoch sehr nützlich, um reine Stämme zu subkultivieren und sie unter anderem lebensfähig zu halten..
Dieser Agar dient auch als Basis für die Herstellung von angereicherten Medien wie Blutagar, insbesondere wenn es erforderlich ist, die Hämolysemuster zu beobachten und die Optoquin- und Bacitracin-Taxa zu montieren, die für die Diagnose von erforderlich sind Streptococcus pneumoniae Y. Streptococcus pyogenes beziehungsweise.
Andererseits ist es in Kombination mit Antibiotika nützlich, fakultative und strenge anaerobe Mikroorganismen von klinischer Bedeutung aus Proben mit gemischter Flora zu isolieren..
Schließlich erfüllen die Zusammensetzung von Trypticasein-Soja-Agar und seine Leistung die Anforderungen, die von den verschiedenen Arzneibüchern (europäisch, japanisch und nordamerikanisch) festgelegt wurden..
Artikelverzeichnis
Für die ordnungsgemäße Entwicklung von Bakterien ist das Vorhandensein von Energiequellen wie Aminosäuren, Vitaminen, puren und pyrimidischen Basen erforderlich..
In diesem Sinne versorgen Triptein und Sojapepton diese Nährstoffe mit Mikroorganismen und ermöglichen so deren volle Entwicklung. Bei anspruchsvollen Bakterien ist es jedoch erforderlich, diesen Agar mit defibriniertem oder erwärmtem Blut zu ergänzen, um seine Anreicherung zu erhöhen..
Wenn dem Medium andererseits Antibiotika zugesetzt werden, wird es zu einem selektiven Medium. Sie können auch 0,6% Hefeextrakt hinzufügen, um die Isolierung von Arten der Gattung Listeria zu begünstigen, während Cystin-Tellurit hinzugefügt wird Y. Lammblut ist ideal für Corynebacterium diphteriae.
Schließlich liefert das Natriumchlorid das osmotische Gleichgewicht des Mediums und der Agar liefert die feste Konsistenz..
Zur Herstellung von Trypticasein-Soja-Agar müssen 40 g des dehydrierten Handelsmediums auf einer Digitalwaage gewogen werden. Es löst sich in einem Liter destilliertem Wasser in einem Kolben.
Die Mischung wird 5 Minuten ruhen gelassen und dann zu einer Wärmequelle gebracht, um das Medium aufzulösen. Es sollte häufig gerührt und 1 oder 2 Minuten gekocht werden. Anschließend wird das Medium im Autoklaven 15 Minuten bei 121 ° C sterilisiert.
Auf 50 ° C abkühlen lassen und in sterile Petrischalen verteilen. Erstarren lassen, umdrehen, in Knopfleisten anordnen und im Kühlschrank aufbewahren.
Der endgültige pH-Wert des Mediums muss 7,3 ± 0,2 betragen.
Es ist zu beachten, dass die Farbe des dehydrierten Kulturmediums hellbeige ist und zwischen 10 und 35 ° C an einem trockenen Ort gelagert werden sollte.
Der hergestellte Agar hat seinerseits eine hell bernsteinfarbene Farbe. Vorbereitete Teller sollten bis zur Verwendung im Kühlschrank (2 bis 8 ° C) aufbewahrt werden..
Die Platten müssen vor Gebrauch Raumtemperatur erreichen.
Blutagar wird durch Zugabe von 5% defibriniertem Blut hergestellt, wenn der tryptische Soja-Agar auf 50 ° C abgekühlt wird. Die Mischung wird durch Drehen mit sanften Bewegungen homogenisiert.
In sterilen Petrischalen servieren. Die mittlere Farbe sollte kirschrot sein.
Gehen Sie zur Herstellung des Blutagars auf TSA-Basis wie oben beschrieben vor, lassen Sie ihn jedoch beim Verlassen des Autoklaven ruhen, bis die Temperatur des Mediums etwa zwischen 56 und 70 ° C liegt. Zu diesem Zeitpunkt wird das Blut platziert und gemischt, bis das Medium braun wird..
In sterilen Petrischalen servieren. Die Farbe des Mediums ist schokoladenbraun.
Das Agar-Herstellungsverfahren ist das gleiche wie das für Platten beschriebene, mit dem Unterschied, dass das Medium nicht auf Petrischalen serviert wird, sondern vor dem Sterilisieren in Röhrchen mit Bakelit-Deckel zwischen 10 und 12 ml verteilt wird..
Anschließend werden die Röhrchen 15 Minuten bei 121 ° C autoklaviert. Beim Verlassen lehnen sie sich mit Hilfe einer Stütze und lassen sie sich verfestigen.
Die vorbereiteten Keile werden nach Oberfläche ausgesät und dienen dazu, bestimmte nicht anspruchsvolle Mikroorganismen für eine bestimmte Zeit lebensfähig zu halten..
Trypticasein Soja-Agar wird in folgenden Fällen verwendet:
-Als Basis für die Herstellung des klassischen Blutagars, der in den meisten Labors routinemäßig verwendet wird.
-Die Isolierung anspruchsvoller Bakterien.
-Beobachtung des Hämolysemusters.
-Diagnosetests ausführen.
-Als Grundlage für die Herstellung von Spezialblutagar für Corynebacterium diphteriae, mit Cystin Tellurit Y. Lammblut.
-Als Basis zur Herstellung von Lammblutagar sowie Kanamycin-Vancomycin für das Wachstum von Anaerobier, insbesondere Bacteroides sp.
-Zur Erhaltung nicht anspruchsvoller Stämme (Bacterioteca).
-Aerobe Mikrobenzahl in der mikrobiellen Grenzwertstudie von Wasser-, Umwelt-, Lebensmittel- und Kosmetikproben.
Proben können direkt auf die Oberfläche von Trypticasein-Soja-Agar gesät werden, der mit Blut oder anderen Zusatzstoffen ergänzt ist. Es wird durch Erschöpfung gesät.
Während Trypticasein-Soja-Agarplatten ohne Zusatzstoffe im Allgemeinen zur Subkultur von Mikrobenstämmen (Bakterien oder Hefen) verwendet werden..
Um die Sterilität der verschiedenen Medien zu überprüfen, die mit Trypticasein-Soja-Basis-Agar hergestellt wurden, wird Folgendes empfohlen: Von jeder hergestellten Charge sollten 1 oder 2 nicht inokulierte Platten oder Röhrchen 24 Stunden bei 37 ° C inkubiert werden, um ihre Sterilität zu demonstrieren. In allen Fällen muss es ohne Wachstum bleiben.
Wenn eine Kontamination festgestellt wird, muss die gesamte Charge verworfen werden..
Die folgenden Bakterienstämme können verwendet werden, um die ordnungsgemäße Funktion von Trypticasein-Soja-Agar zu untersuchen: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 und Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Die Stämme werden ausgesät und 24 Stunden bei 37 ° C aerob inkubiert.
In allen Fällen muss das Wachstum zufriedenstellend sein.
Pilze wie Complex können ebenfalls verwendet werden Candida albicans ATCC 10231 und Aspergillus niger ATCC 16404. Für beide Stämme wird ein gutes Wachstum erwartet.
Die folgenden Stämme können verwendet werden, um die ordnungsgemäße Funktion des mit dieser Base hergestellten Blutagars zu überprüfen: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 und Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.
Sie werden ausgesät und 24 Stunden bei 37 ° C in Mikroaerophilie inkubiert..
In allen Fällen muss das Wachstum zufriedenstellend sein, wobei zu berücksichtigen ist, dass in S. pyogenes Beta-Hämolyse (klarer Lichthof um die Kolonie) sollte beobachtet werden und in beiden Stämmen von S. pneumoniae Eine Alpha-Hämolyse (grünlicher Lichthof um Kolonien) sollte beobachtet werden.
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