Das Czapek-Agar (CZA) ist ein selektives festes Kulturmedium, das speziell für die Kultivierung von saprophytischen Bakterien und Pilzen entwickelt wurde. Es wurde vom Botaniker Friedrich Johann Franz Czapek polnischer Herkunft und dem amerikanischen Chemiker Arthur Wayland Dox geschaffen; Aus diesem Grund wird dieser Agar auch als Czapek-Dox-Medium bezeichnet..
Das ursprüngliche Medium war flüssig, aber später wurde Agar zugegeben, um es zu einem festen Medium zu machen. Czapek-Medium besteht aus Natriumnitrat, Bipotassiumphosphat, Magnesiumsulfat, Kaliumchlorid, Eisensulfat, Saccharose, Agar und destilliertem Wasser..
Der pH-Wert von Czapek-Agar beträgt 7,3, es gibt jedoch eine Variante, der 10% Milchsäure zugesetzt wird, deren pH-Wert bei 3,5 bleibt. Dieses saure Medium wird zur Kultivierung von acidophilen Mikroorganismen verwendet.
Andererseits modifizierten einige Handelshäuser die Zusammensetzung von Czapek-Agar durch Ändern von Magnesiumsulfat und Bipaliumphosphat durch Glycerophosphat; Diese Modifikation verhindert die Bildung des Magnesiumphosphatniederschlags, der mit der herkömmlichen Formel beobachtet wird. Ebenso gibt es eine andere Variante, der Hefeextrakt zugesetzt wird.
Schließlich wird Czapek-Agar von der American Public Health Association APHA für die Untersuchung von empfohlen Actinomycetes sp., Aspergillus sp., Paecilomyces sp Y. Penicillium sp. Diese Arten zeichnen sich durch Umweltmikroorganismen und opportunistische Krankheitserreger aus..
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Dieses Medium enthält Saccharose; Dieses Kohlenhydrat dient als Kohlenstoffquelle, während Natriumnitrat die Stickstoffquelle ist, aber im Gegensatz zu anderen Medien ist der bereitgestellte Stickstoff anorganisch..
Aus diesem Grund wird das Czapek-Medium als selektiv angesehen, da nur Mikroorganismen wachsen können, die anorganische Verbindungen als einzige Stickstoffquelle verwenden können..
Als Regulator der Osmolarität des Mediums gilt Bipotassiumphosphat. Magnesiumsulfat, Kaliumchlorid und Eisensulfat liefern ihrerseits wesentliche Mineralien für das Wachstum saprophytischer (frei lebender) Mikroorganismen. Mit dieser Formel wird ein Niederschlag von Magnesiumphosphat gebildet.
Schließlich ist Agar-Agar die Verbindung, die dem Medium die feste Konsistenz verleiht, und Wasser ist das Lösungsmittel für alle Komponenten..
Mit der modifizierten Czapek-Agarformel entsteht kein Niederschlag und die Wachstumsleistung einiger Pilze wird verbessert.
Der extreme Säuregehalt von Acid Czapek Agar macht es zu einem selektiveren Medium, das nur das Wachstum von acidophilen Mikroorganismen ermöglicht, die anorganischen Stickstoff nutzen können. Während Czapek-Hefe-Agar die Leistung bestimmter Pilze verbessert.
49 g des dehydrierten Kulturmediums werden abgewogen und in destilliertem Wasser gelöst. Hitze bis zum Kochen anwenden. Schütteln Sie die Mischung häufig, bis sie vollständig aufgelöst ist..
Die gelöste Mischung in Röhrchen verteilen und 15 Minuten bei 121 ° C autoklavieren. Beim Herausnehmen aus dem Autoklaven vor dem Ablegen der Röhrchen homogenisieren und erstarren lassen.
Die gelöste Mischung 15 Minuten bei 121 ° C autoklavieren und auf 50 ° C abkühlen lassen, homogenisieren und 20 ml in sterile Petrischalen gießen. Erstarren lassen, umdrehen und bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahren.
Der pH sollte 7,3 ± 0,2 betragen. Die Farbe des dehydrierten Mediums ist weiß und das hergestellte Medium ist hell bernsteinfarben, aufgrund des Vorhandenseins eines ausflockenden Niederschlags leicht trüb..
Bereiten Sie wie bereits beschrieben vor, geben Sie jedoch 10 ml sterile 10% ige Milchsäure für jeden Liter des hergestellten Mediums hinzu. Das modifizierte Czapek-Medium muss einen pH-Wert von 3,5 ± 0,2 aufweisen.
45,4 g des dehydrierten Mediums werden abgewogen und in 1 Liter Wasser gelöst. Der Rest der Zubereitung ist der gleiche wie oben beschrieben. Die Farbe des dehydrierten Mediums ist weiß und das vorbereitete Medium ist weißlich. Der endgültige pH-Wert des Mediums beträgt 6,8 ± 0,2.
Auch Czapek Hefeextrakt-Agar (CYA) genannt. Enthält die Elemente des klassischen Czapek-Agars plus Hefeextrakt.
Das Czapek-Medium wird verwendet, um unter anderem in Proben von Boden, Gemüse, Getreide, Luft, Insekten nach saprophytischen Mikroorganismen zu suchen..
Czapek-Agar bei saurem pH wird für das Wachstum von acidophilen Mikroorganismen verwendet, während modifizierter Czapek-Agar besonders für die Bildung von Chlamydosporen in Spezies des Komplexes nützlich ist. Candida albicans.
Schließlich ist Czapek-Hefeagar für die Isolierung von Aspergillus und Penicillium sehr nützlich..
Um im Boden nach Actinomyceten zu suchen, gehen Sie wie folgt vor: Die Probe wird 30 Minuten lang mit phenolisiertem Wasser behandelt und anschließend 1 ml der Suspension auf Czapek-Agar ausgesät. 5 bis 7 Tage bei 28 ° C inkubieren.
Für Gemüse-, Getreide- und Insektenproben werden sie direkt auf den Agar gelegt. Sie können auch Verdünnungen vornehmen und 0,1 ml auf die Oberfläche des Agars säen..
Für die Aussaat wird eine gerade Schlaufe oder Nadel verwendet, sie wird mit dem Tupfer imprägniert und der Agar wird durch eine Punktion beimpft, bis er die Basis der Platte berührt. 24 Stunden bei 28 ° C inkubieren und unter einem Mikroskop über und unter der Platte untersuchen, ob sich Chlamydosporen gebildet haben..
Die Inkubationstemperatur und -zeit variieren je nach Art des zu isolierenden Mikroorganismus. Die Platten werden im Allgemeinen ein bis zwei Wochen in einem Temperaturbereich von 20 bis 25 ° C inkubiert..
Es gibt jedoch spezielle Bedingungen für einige Stämme. Zum Beispiel haben die meisten Arten der Gattung Aspergillus ein optimales Wachstum bei 30 ° C; jedoch A. fumigatus wächst bei 50 ° C..
In Bezug auf die Inkubationszeit sind jedoch ein oder zwei Wochen normal Candida albicans kann sich in 24 bis 48 Stunden bei 25 ° C entwickeln.
Es entwickelt sich in 12 Tagen Inkubation bei 27 ° C. Ihre Kolonien sind klein (25 mm).
Die Kolonien haben ein samtiges Aussehen mit einem definierten weißen Rand und in der Mitte einen blaugrünen Farbton, der mit zunehmendem Alter grau wird. Die Rückseite der Kolonie ist orange und platziert aufgrund der Pigmentproduktion die Mitte der gleichen Farbe.
Entwickelt sich mit weißem bis gelbem Myzel und schwarzen Sporen.
Es entwickeln sich cremige hellbeige Kolonien. In modifiziertem Czapek-Agar bilden sich Chlamydosporen.
Ein dunkelgrünes Myzel entwickelt sich in 7 Tagen bei 25 ° C..
Um die Qualität des Kulturmediums zu bewerten, können zertifizierte Kontrollstämme ausgesät werden, wie z. Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.
Aspergillus niger entwickelt in ca. 5 Tagen weißes bis gelbes Myzel und schwarze Sporen Candida albicans es wird in 24 Stunden Inkubation bei 25 ° C ein zufriedenstellendes Wachstum aufweisen; Die Kolonien sind cremefarben.
Einige Studien haben gezeigt, dass für die Gewinnung von Actinomyceten der Agar mit der besten Ausbeute Kartoffel-Dextrose-Agar ist, wobei Czapek-Agar an zweiter Stelle steht. Für die Gewinnung von Aspergillus und Penicillium ist Czapek-Agar derjenige, der die höchste Wiederfindungsrate liefert..
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