Das BHI-Agar Brain Heart Infusion Agar ist ein festes nahrhaftes Kulturmedium. Auf Spanisch wird es als Gehirn-Herz-Infusionsagar bezeichnet. Es ist ein nicht selektives Kulturmedium, was bedeutet, dass sich alle Arten von grampositiven und gramnegativen Bakterien sowie einige Hefe- und Fadenpilze entwickeln können..
Es besteht aus einer Infusion von Gehirn und Herz von Rindfleisch, peptischem Hydrolysat aus tierischen Geweben, Pankreashydrolysat von Kasein, Natriumchlorid, Glucose, Dinatriumphosphat und Agar..
Es ist zu beachten, dass BHI-Agar eines der am häufigsten verwendeten Kulturmedien in bakteriologischen Labors ist. Kann ohne Ergänzungsmittel als Primärkultur, Subkultur von Kolonien, die auf anderen selektiven Medien erhalten wurden, oder zur Aufrechterhaltung von Stämmen im Labor verwendet werden.
Andererseits ist es ein ideales Medium, um als Basis für die Herstellung von angereicherten Medien wie Blutagar und Schokoladenagar verwendet zu werden. Beide sind ideal für die Isolierung anspruchsvoller Mikroorganismen aus ernährungsphysiologischer Sicht. Es sollte jedoch beachtet werden, dass es, da es Glucose enthält, nicht zur Beobachtung von Hämolysemustern geeignet ist..
Ebenso kann BHI-Agar zur Herstellung spezieller Medien zur Isolierung schwer zu züchtender pathogener Mikroorganismen in gängigen Medien verwendet werden, einschließlich: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae und Histoplasma capsulatum.
Mit dem Antibiotikum wird BHI-Agar zu einem selektiven Medium für die Isolierung von Pilzen.
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Es ist ein nahrhaftes Kulturmedium zur Isolierung mäßig anspruchsvoller Mikroorganismen, und seine Anreicherung kann durch Zugabe von Blut und anderen Nahrungsergänzungsmitteln erhöht werden..
Es ist ein nicht selektives Kulturmedium und ermöglicht daher das Wachstum der meisten grampositiven und gramnegativen Bakterien sowie einiger Pilze. Es kann jedoch durch Zugabe von Antibiotika selektiv werden..
Das Medium enthält Gehirn- und Herzinfusionen von Rindfleisch, peptisches Hydrolysat aus tierischem Gewebe und Kaseinhydrolysat aus der Bauchspeicheldrüse; Alle diese Verbindungen wirken als Quellen für Vitamine, Aminosäuren, Stickstoff und Kohlenstoff.
Glukose ist ein Kohlenhydrat, das Mikroorganismen nach ihrer Fermentation mit Energie versorgt. Währenddessen halten Natriumchlorid und Dinatriumphosphat das osmotische Gleichgewicht aufrecht und liefern einen pH-Wert nahe der Neutralität. Schließlich verleiht der Agar dem Medium die feste Konsistenz.
52 g des dehydrierten Mediums werden gewogen und in einem Liter destilliertem Wasser gelöst. Bringen Sie die Mischung bis zum Kochen zu einer Wärmequelle und rühren Sie sie während des Auflösungsprozesses häufig um..
BHI-Agarplatten oder -keile können ohne Zusatzstoffe hergestellt werden.
Für die Herstellung von Keilen die Zubereitung servieren, bis die Hälfte jedes Röhrchens gefüllt ist, abdecken und in einem Autoklaven bei 121 ° C 15 Minuten lang sterilisieren. Später bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahren.
Die gelöste Mischung wird 15 Minuten lang bei 121 ° C autoklaviert, beim Verlassen auf 50 ° C abkühlen gelassen und 20 ml des Mediums in sterilen Petrischalen serviert. Sie dürfen sich verfestigen, werden umgedreht und bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahrt. Lassen Sie die Platten vor dem Säen auf Raumtemperatur kommen.
Der pH-Wert des Mediums muss bei 7,4 ± 0,2 bleiben.
Unvorbereitetes Medium hat eine beige Farbe und eine hell bernsteinfarbene Farbe.
Nach dem Sterilisieren des Mediums auf eine Temperatur von ungefähr 45 bis 50 ° C abkühlen lassen, dann das Blut (50 ml) hinzufügen, vorsichtig zum Homogenisieren mischen und 20 ml in jeder Petrischale aseptisch servieren. Wenn sich Blasen auf der Platte bilden, muss die leichtere Flamme schnell über die Blasen geleitet werden, um sie zu beseitigen.
Ebenso können spezielle Medien hergestellt werden, indem die entsprechenden Additive zugesetzt werden, wenn die Mischung eine Temperatur von 45 bis 50 ° C erreicht..
Die Mitte ist kirschrot.
BHI-Agar ohne Zusatzstoffe eignet sich als Primärkultur und zur Aussaat von reinen Stämmen von Mikroorganismen mit geringem oder mittlerem Anspruch zur anschließenden Identifizierung..
Da es sich um ein helles Medium handelt, eignet es sich ideal zur Beobachtung von Pigmenten. Da es keine störenden Substanzen enthält, können einige biochemische Tests wie Oxidase und Katalase durchgeführt oder andere biochemische Tests aus Kolonien durchgeführt werden von diesem Agar.
Ebenso werden BHI-Agarkeile häufig zur Aufrechterhaltung von Stämmen für eine bestimmte Zeit im Labor (Bacterioteca) verwendet..
Die oberflächensaatenden Platten oder Keile mit Bakterienstämmen werden 24 bis 48 Stunden bei 37 ° C inkubiert. Während bei Pilzen die Temperatur und die Inkubationszeit von der Art des gesuchten Pilzes abhängen..
Mit dieser Basis können Sie angereicherte und selektive Medien vorbereiten.
Seine Hauptfunktion besteht darin, als Grundlage für die Herstellung von Blutagar für den routinemäßigen Einsatz in mikrobiologischen Labors zu dienen. Insbesondere die BHI-Base fördert die Isolierung von Stämmen von Streptococcus sp. Es hat jedoch den Nachteil, dass es nicht zur Beobachtung von Hämolysemustern geeignet ist, da es Glucose enthält..
Es wird auch zur Herstellung von Kaninchen- oder Pferdeblutagar zur Isolierung von verwendet Haemophilus sp. Für bessere Ergebnisse kann eine Anreicherungsergänzung (IsoVitaleX) hinzugefügt werden.
Wenn die Proben aus den Atemwegen auf den Agar gelangen, kann Bacitracin zugesetzt werden, um die begleitende Flora zu hemmen und die Wahrscheinlichkeit der Erholung der Stämme von zu erhöhen Haemophilus sp.
Andererseits kann Blutagar (Lamm oder Mensch) mit Cystintellurit zur Isolierung hergestellt werden Corynebacterium diphtheriae. Ebenso ist es nützlich, Kaninchenblutagar unter Zusatz von Cystin und Glucose zur Isolierung von Cystin herzustellen Francisella tularensis.
Die Blutagarplatten werden durch Erschöpfung ausgesät und 24-48 Stunden bei 35-37ºC in Mikroaerophilie (5-10% CO) inkubiertzwei).
Dieses Medium mit dem Zusatz von Antibiotika kann Sabouraud-Agar für die Isolierung von Pilzen ersetzen..
Die Kombination von BHI-Agar mit Chloramphenicol - Gentamicin oder Penicillin -, Streptomycin und Pferdeblut ist ideal für die Isolierung von Histoplasma capsulatum.
Je nach zu isolierendem Mikroorganismus wird eine Inkubation bei 35-37 ° C oder bei Raumtemperatur bei Aerobiose empfohlen. Manchmal ist eine Inkubation in beiden Temperaturbereichen erforderlich, wobei 2 Platten verwendet werden..
Einige Pilze mögen Trichophyton-Mentagrophyten sollte bis zu 7 Tage bei Raumtemperatur inkubiert werden.
Von jeder hergestellten Charge wird empfohlen, 1 Platte oder Keil 24 Stunden bei 37 ° C zu inkubieren und sicherzustellen, dass kein Wachstum vorliegt. Besonders wichtig bei der Herstellung von Blutagar, da es sich um ein leicht kontaminierbares Medium handelt.
Andererseits kann die Qualität des Mediums bewertet werden, indem bekannte oder zertifizierte Standardstämme geimpft und ihre Entwicklung beobachtet werden..
In diesem Sinne, um BHI-Agar ohne Zusatzstoffe zu bewerten, werden Stämme von Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 oder Candida albicans ATCC 10231. 24 bis 48 Stunden bei 37 ° C in Aerobiose inkubieren. In allen Fällen wird ein zufriedenstellendes Wachstum erwartet.
Zur Bewertung von Blutagarplatten werden Stämme von Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 oder Trichophyton-Mentagrophyten ATCC 9533.
Bakterienstämme werden 24 Stunden bei 37 ° C in Mikroaerophilie inkubiert, während der Pilz bis zu 7 Tage bei Raumtemperatur in einer feuchten Kammer inkubiert wird. In allen Fällen wird ein zufriedenstellendes Wachstum erwartet.
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