Das TCBS-Agar ist ein hochselektives und differenzielles festes Kulturmedium, das insbesondere zur Isolierung und Kultivierung von Bakterien der Gattung Vibrio verwendet wird Vibrio cholerae, V. vulnificus Y. V. parahaemolyticus als Hauptpathogene dieser Gattung.
Das Akronym TCBS steht für Thiosulfate Citrate Bile Sucrose. Dieser Agar ist auch als selektives Medium für Vibrios bekannt. Die ursprüngliche Formel wurde von Nakanishi erstellt und später von Kobayashi modifiziert.
Es besteht aus Hefeextrakt, Fleischpepton, Triptein, Natriumcitrat, Natriumthiosulfat, Ochsengalle, Saccharose, Natriumchlorid, Eisen (III) -citrat, Bromthymolblau, Thymolblau und Agar..
Diese Zusammensetzung ermöglicht eine adäquate Entwicklung von Vibrio-Arten aus Wasser-, Lebensmittel- und Kotproben; außer Vibrio hollisae, das wächst nicht in dieser Umgebung. Darüber hinaus kann TCBS-Medium das Wachstum anderer begleitender Bakterien, insbesondere von Coliformen, hemmen..
Aufgrund der schwerwiegenden gastrointestinalen und extraintestinalen Probleme, die einige Arten der Gattung Vibrio verursachen, ist ihre Diagnose sehr wichtig. Menschen sind hauptsächlich durch den Verzehr von rohen oder nicht gekochten Lebensmitteln aus dem Meer oder verschmutzten Gewässern infiziert, aber auch durch Wundinfektionen.
Aus diesem Grund sollten klinische Laboratorien TCBS-Agar in die Stuhlkulturstudie von flüssigen Stuhlproben einbeziehen, insbesondere mit dem Auftreten von Reiswasser. Insbesondere, wenn der Patient angibt, mit Meerwasser in Kontakt gekommen zu sein oder Schalentiere oder Fische verzehrt zu haben.
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Hefeextrakt, Fleischpeptonen und Triptein sind die Nahrungsquelle dieses Mediums. TCBS-Agar ist jedoch für die meisten Bakterien ein unwirtliches Medium..
Seine hohe Selektivität ergibt sich aus der Zugabe von Natriumcitrat und Ochsengalle; beide sind Hemmstoffe, die dem Medium auch einen alkalischen pH-Wert verleihen, das Wachstum der begleitenden Flora einschränken und das Wachstum von begünstigen V. cholerae, unter anderen Arten. Vor allem Vibrio cholerae ist sehr säureempfindlich.
Natriumchlorid seinerseits gleicht das Medium osmotisch aus. Da seine Konzentration hoch ist, wirkt es außerdem als Hemmstoff und begünstigt das Wachstum von halophilen Bakterien..
Saccharose ist der fermentierbare Zucker, der zusammen mit den pH-Indikatoren für blaues Bromthymol und Thymolblau dem Medium seinen unterschiedlichen Charakter verleiht. Aus diesem Grund ist es mit diesem Medium möglich, Saccharose-fermentierende Stämme von nicht fermentierenden zu unterscheiden..
Kolonien von Saccharose-fermentierenden Stämmen entwickeln eine gelbe Farbe und wandeln das Medium durch Säureproduktion von grün nach gelb um. Nichtfermenter werden durchscheinend und das Medium behält die ursprüngliche Farbe (grün).
Ebenso enthält dieses Medium Natriumthiosulfat als Schwefelquelle und Eisen (III) -citrat als Entwicklungsmittel. Beide zeigen Bakterien, die Schwefelwasserstoff (farbloses Gas) produzieren können. Die H.zweiS wird aus Thiosulfat gebildet und anschließend bildet sich bei Reaktion mit Eisen (III) -citrat ein sichtbarer schwarzer Niederschlag..
Schließlich ist der Agar derjenige, der dem Medium die feste Konsistenz verleiht.
89 g des dehydrierten Mediums werden gewogen und in einem Liter destilliertem Wasser gelöst. Helfen Sie beim Auflösen durch Erhitzen und häufiges Rühren. Die Mischung kann bis zu 2 Minuten gekocht werden..
Dieses Medium wird nicht autoklaviert. Nach dem Auflösen wird es direkt auf sterilen Platten serviert. Wenn sie sich verfestigen, werden sie umgekehrt in Plaquern angeordnet und bis zur Verwendung im Kühlschrank (2-8 ° C) aufbewahrt..
Das Medium muss nach der Herstellung bei pH 8,6 ± 0,2 bleiben.
Die Farbe des dehydrierten Mediums ist hellbeige oder grünlich-beige, und die Farbe des Mediums ist waldgrün oder bläulichgrün.
Es ist wichtig, dass sich die Platten vor dem Aussäen der Proben erwärmen..
Die häufigste Probe für die Vibrios-Isolierung ist der Durchfall-Stuhl..
Stuhlproben müssen auf dem Cary Blair-Medium transportiert werden, wenn sie nicht sofort auf das selektive Medium ausgesät werden können..
Um die Empfindlichkeit der Kultur zu erhöhen, kann der Kot maximal 8 Stunden lang als Anreicherungsmedium durch Peptonwasser mit einem pH-Wert von 8,4 geleitet und von dort in das TCBS-Medium subkultiviert werden..
Es sollte auch berücksichtigt werden, dass einige Vibrios-Stämme bei immunsupprimierten Patienten eine Septikämie verursachen können, weshalb sie aus Blutkulturen isoliert werden können. Ebenso können Wasser- und Lebensmittelproben aus dem Meer analysiert werden, wenn es zu epidemischen Ausbrüchen der Cholera kommt..
Das Inokulum der untersuchten Probe muss hervorstechen, die Aussaat erfolgt nach der Streifenmethode durch Erschöpfung. Die Platten werden 24 Stunden bei 37 ° C in Aerobiose inkubiert.
Die mutmaßlichen Kolonien von Vibrio cholerae Sie sind mittelgroß, glatt, undurchsichtig, dünnkantig und aufgrund der fermentierenden Saccharose gelb gefärbt.
Ebenso die Arten von V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii und einige V. vulnificus. Andere klinisch wichtige Vibrios-Arten wie V. parahaemolyticus Fermentieren Sie keine Saccharose, die sich als olivgrüne Kolonien entwickelt.
Andererseits muss berücksichtigt werden, dass einige Stämme von Aeromonas und Plesiomonas, die Oxidase (+) sind, in diesem Medium wachsen und gelbe Kolonien entwickeln können, die den Kliniker verwirren können. Während einige Stämme von Pseudomonas auch Oxidase (+) als grüne Kolonien wachsen wie V. parahaemolyticus.
Der Oxidase-Test, der für die Gattung Vibrio positiv ist, sollte niemals an Kolonien durchgeführt werden, die aus TCBS-Agar erhalten wurden, da das erhaltene Ergebnis falsch negativ ist. Verbindungen in der Mitte stören diesen Test stark. Daher muss es aus Subkulturen auf Blutagar durchgeführt werden..
Um zu beweisen, dass sich das Medium in einem guten Zustand befindet, ist es ratsam, bekannte oder zertifizierte Kontrollstämme zu säen und zu beobachten, ob das Wachstum die erwarteten Eigenschaften erfüllt..
Hierfür können Sie Stämme verwenden von:
-Vibrio cholerae - zufriedenstellendes Wachstum (gelbe Kolonien, durchscheinende Grenze).
-Vibrio parahaemolyticus - zufriedenstellendes Wachstum (Kolonie mit grünem Zentrum und durchscheinendem Rand).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - zufriedenstellendes Wachstum (gelbe Kolonien mit gleichfarbigen Lichthöfen um die Kolonie).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - vollständige oder teilweise Hemmung (kleine gelbe oder durchscheinende Kolonien).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - teilweise oder vollständige Hemmung (blaue Kolonien).
-Escherichia coli ATCC 25922 - Vollständig gesperrt.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Vollständige oder teilweise Hemmung. (Kleine Kolonien grüne Mitte durchscheinende Kante).
Die Inkubation von nicht geimpftem Medium sollte unverändert bleiben.
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