Das Endo-Agar oder Endo-Medium ist ein festes, differenzielles Kulturmedium mit einem gewissen Grad an Selektivität. Die ursprüngliche Formel wurde 1904 von Endo entwickelt, um laktosefermentierende von nicht fermentierenden Bakterien zu unterscheiden. Ursprünglich war es zum Isolieren gedacht Salmonella typhi, aber später wandte sich das Ziel des Mediums der Suche nach Coliformen zu.
Das Endo-Agar-Prinzip ist geblieben, aber seine Formulierung hat im Laufe der Jahre unzählige Änderungen erfahren. Derzeit besteht das Medium aus einer Magenverdauung von tierischem Gewebe, Laktose, Dikaliumhydrogenphosphat, Natriumsulfit, basischem Fuchsin und Agar..
Die Hauptverwendung des Mediums war mit der Isolierung und Differenzierung von gramnegativen Bazillen verbunden, die zur Familie der Enterobacteriaceae und zu anderen nahen Familien gehören..
Lange Zeit wurde es zum Nachweis von Coliformen in Wasser-, Milch- und Lebensmittelproben verwendet, aber heute wurde die Verwendung dieses Mediums von anderen mit ähnlichen Funktionen verdrängt. Einige mikrobiologische Laboratorien verwenden diesen Agar jedoch zur Isolierung von Enterobacteriaceae aus Proben klinischen Ursprungs..
Artikelverzeichnis
Endo-Agar enthält Peptonen, die als Quelle für Aminosäuren, Stickstoff, Kohlenstoff und Energie dienen und für das Wachstum anspruchsloser Mikroorganismen erforderlich sind..
Andererseits wird der leicht selektive Charakter des Agars durch die Zugabe von Natriumsulfit und basischem Fuchsin bereitgestellt; Beide Komponenten hemmen das Wachstum der meisten grampositiven Bakterien teilweise oder vollständig.
Der unterschiedliche Charakter ergibt sich aus dem Vorhandensein des fermentierbaren Kohlenhydrats, in diesem Fall Laktose und basischem Fuchsin, das auch als pH-Indikator dient..
Gramnegative Bakterien, die auf diesem Agar wachsen und Laktose fermentieren können, bilden stark rosa Kolonien. pathognomonisch sein von Escherichia coli die Bildung dunkelroter Kolonien mit einem schillernden grünlich-metallischen Schimmer. Dies ist auf die hohe Produktion von Säuren aus der Kohlenhydratfermentation zurückzuführen..
Es ist zu beachten, dass das Medium um die Kolonien ebenfalls eine stark rosa Farbe annimmt. Während nicht laktosefermentierende gramnegative Stäbchen blassrosa gefärbte Kolonien bilden, die mittel oder farblos ähnlich sind.
Dikaliumhydrogenphosphat gleicht den pH-Wert des Mediums aus und Agar ist die Komponente, die die feste Konsistenz liefert.
41,5 g des dehydrierten Mediums werden abgewogen und in 1 Liter destilliertem Wasser gelöst. Erhitze die Mischung unter häufigem Rühren, bis sich das Medium vollständig aufgelöst hat. Sterilisieren Sie im Autoklaven bei 121 ° C und 15 lb Druck 15 Minuten lang.
Lassen Sie es beim Herausnehmen aus dem Autoklaven auf eine Temperatur von ca. 45-50 ° C abkühlen und schütteln Sie die Mischung vor dem Servieren, um sie zu homogenisieren. Gießen Sie 20 ml in sterile Petrischalen.
Lassen Sie die Teller erstarren, umdrehen und in einem Plaquero aufbewahren oder mit dunklem Papier umwickeln, bevor Sie sie im Kühlschrank aufbewahren. Es ist sehr wichtig, das vorbereitete Medium vor direktem Licht zu schützen. Eine empfohlene Vorgehensweise besteht darin, die genaue Menge vorzubereiten, die Sie benötigen.
Bei Lagerung im Kühlschrank sollten die Teller vor Gebrauch aufgewärmt werden..
Der pH-Wert des Mediums sollte zwischen 7,2 und 7,6 liegen und die Farbe des hergestellten Mediums ist blassrosa..
Es gibt eine andere Version von Endo-Agar (m-Endo), die der Formel von McCarthy, Delaney und Grasso folgt, die mehr Verbindungen enthält und in der Form der Herstellung variiert.
Diese Variante enthält: Laktose, Tryptose, enzymatische Verdauung von Kasein, enzymatische Verdauung von Tiergewebe, Natriumchlorid, zweibasisches Kaliumphosphat, Natriumsulfit, Hefeextrakt, einbasiges Kaliumphosphat, basisches Fuchsin, Natriumdesoxycholat, Laurylsulfat-Natrium und Agar.
In diesem Fall werden 51 g des dehydrierten Mediums gewogen und in 1 Liter destilliertem Wasser suspendiert, das 20 ml Ethanol enthält..
Unter Rühren leicht erhitzen, bis sich das Medium vollständig aufgelöst hat. Es sollte nicht überhitzt und nicht autoklaviert werden. Sobald die Mischung homogen ist, in sterilen Petrischalen servieren und erstarren lassen..
In einigen Ländern wird es immer noch verwendet, um Gesamt- und Fäkalkoliforme in Lebensmittel- und Wasserproben zu zählen, insbesondere auf das Vorhandensein von Escherichia coli als Hauptindikator für die Verunreinigung des Stuhls.
M-Endo-Agar wird von der American Public Health Association (APHA) zur Überwachung und Kontrolle von Desinfektions- und Abwasserbehandlungsprogrammen sowie zur Bewertung der Trinkwasserqualität empfohlen..
Die am weitesten verbreitete Methode ist die Membranfiltration, nachdem die Probe 2 bis 4 Stunden lang mit Laurylsulfatbrühe angereichert wurde..
Es kann auch als Ersatz für EMB-Agar bei der mikrobiologischen Analyse von Lebensmitteln und Wasser mit der wahrscheinlichsten Zahlentechnik (MPN) verwendet werden, insbesondere in der vollständigen Bestätigungsphase, um das Vorhandensein von zu bestätigen E coli aus trüben EG-Brühen.
Zur Bewertung der Qualität der hergestellten Endo-Agar-Charge werden bekannte oder zertifizierte Kontrollstämme ausgesät..
Zu den Stämmen, die für diesen Zweck verwendet werden können, gehören: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 und Enterococcus faecalis ATCC 11700.
Die Stämme werden durch Erschöpfung ausgesät und 24 Stunden bei 37 ° C in Aerobiose inkubiert.
Die erwarteten Ergebnisse sind:
-Endo-Medium hat eine geringe Selektionskraft, daher ist es möglich, dass einige grampositive Mikroorganismen wie Staphylococcus, Enterococcus und sogar Hefen wachsen können.
-Andere Bazillen, die nicht zur Familie der Enterobacteriaceae gehören, können sich in diesem Medium entwickeln, wie zum Beispiel Pseudomonas sp Y. Aeromonas sp. Die Eigenschaften dieser Stämme sind farblose unregelmäßige Kolonien.
-Dieses vorbereitete Medium ist sehr lichtempfindlich, daher verschlechtert eine längere Exposition das Indikatorsystem und beschädigt das Medium irreversibel..
-Die Bestandteile des Mediums gelten als krebserregend, daher sollte ein direkter Kontakt vermieden werden.
-Das dehydrierte Medium ist sehr hygroskopisch und muss in seinem Originalbehälter bei Raumtemperatur, dicht verschlossen und in trockener Umgebung aufbewahrt werden..
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