Cetrimid-Agar-Begründung, Herstellung, Verwendung

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Egbert Haynes

Das Cetrimid-Agar o Cetrimid ist ein selektives festes Kulturmedium, das zur Isolierung von Pseudomonas aeruginosa. Es basiert auf der Hervorhebung der Produktion charakteristischer Pigmente dieser Art und wurde aus der Modifikation von Tech-Agar hergestellt, die von King, Ward und Raney hergestellt wurde..

Die ursprüngliche Formel enthielt Salze von Magnesiumchlorid, Kaliumsulfat, Pankreasverdauung von Gelatine und Agar-Agar. Die Modifikation der Formel bestand aus der Zugabe von Cetrimid (Cetyltrimethylammoniumbromid) und Glycerin.

Mit Pseudomonas aeruginosa besiedelter Cetrimid-Agar Quelle: BiotechMichael [Public Domain], aus Wikimedia Commons

Cetrimid-Agar ist nützlich für die mikrobiologische Untersuchung von Proben, bei denen das Vorhandensein von Pseudomonas aeruginosa. Es ist zu beachten, dass dieses Bakterium von größter Bedeutung ist, da es zwar Teil der normalen Umweltmikrobiota ist, sich jedoch häufig als opportunistischer Erreger verhält.

Eines der häufigsten Probleme, die durch diesen Keim verursacht werden, sind daher nosokomiale Infektionen, dh solche, die im Krankenhausumfeld auftreten und Patienten mit einem geschwächten Immunsystem angreifen.

Andererseits sind aufgrund der Affinität dieses Mikroorganismus zur Feuchtigkeit die am stärksten gefährdeten Kontaminationsziele: Atemunterstützungsgeräte, Medikamente, Vernebler, Wasserquellen, Klimaanlagen, Desinfektionsmittel, Seifenlösungen, injizierbare Lösungen, offene Wunden, Katheter, unter anderem Harnschläuche.

In diesem Sinne ist Cetrimidagar nützlich, um mikrobiologische Kontrollen und Kulturen an den zuvor genannten Elementen durchzuführen..

Artikelverzeichnis

  • 1 Begründung
    • 1.1 Interpretation
  • 2 Vorbereitung
  • 3 Verwendungen
  • 4 Gesät
  • 5 Einschränkungen
  • 6 Qualitätskontrolle
  • 7 Referenzen

Basis

Cetrimid-Agar basiert auf der Fähigkeit des Mediums, das Wachstum von zu fördern P. aeruginosa, stimulieren die Produktion seiner Pigmente und hemmen wiederum das Wachstum anderer Mikroorganismen.

Diese Eigenschaften sind auf die Funktion jeder ihrer Komponenten zurückzuführen. Das vorhandene Gelatinepepton dient als Quelle für Stickstoff, Vitamine und Mineralien. Glycerin oder Glycerin wirkt als Kohlenstoffquelle.

Cetrimid (Cetyltrimethylammoniumbromid) ist seinerseits die Substanz, die das Wachstum anderer Bakterien hemmt als P. aeruginosa, einschließlich anderer Arten derselben Gattung.

Die Hemmung tritt auf, weil Cetramid als kationisches Detergens wirkt und es schafft, die Plasmamembran der meisten Bakterien zu destabilisieren, mit Ausnahme von P. aeruginosa und einige andere, die es schaffen zu überleben.

Andererseits enthält es Magnesiumchlorid und Kaliumsulfat. Diese Verbindungen stimulieren die phänotypische Expression in Bezug auf die Fähigkeit zu Pseudomonas aeruginosa zur Herstellung verschiedener Pigmente, einschließlich: Pyocyanin, Pyoverdin, Pyorrubin, Pyomelanin und Fluorescein. Schließlich enthält es Agar-Agar, was ihm die feste Konsistenz verleiht.

Interpretation

Die Interpretation des in diesem Agar erhaltenen Wachstums wird wie folgt durchgeführt:

Die Beobachtung runder, glatter Kolonien mit regelmäßigen Rändern unter Bildung von blaugrünlichen, grünen, braunen oder rötlichen Pigmenten sowie die Emission von fruchtigem Geruch (Aminoacetophenon) ist ein vermutliches Ergebnis des Vorhandenseins dieses Bakteriums in der Probe..

Darüber hinaus ist es bezeichnend für P. aeruginosa die Beobachtung eines hellgrünlich-gelben Pigments auf den Kolonien, wenn die Platte ultraviolettem Licht ausgesetzt wird.

Fluoreszenz von P. aeruginosa-Kolonien auf Cetrimid-Agar unter ultraviolettem Licht.

Es ist zu beachten, dass jede beobachtete Farbe auf die Produktion eines bestimmten Pigments zurückzuführen ist. Das blaugrüne Pigment entspricht der Produktion von Pyocyanin, das Grün zu Pyoverdin, das Rötlich zu Pyorrubin, das Braun zu Pyomelanin und die hellgelbgrüne Fluoreszenz unter UV-Licht zu Fluorescein..

Vorbereitung

43 g des dehydrierten Mediums werden abgewogen und in destilliertem Wasser gelöst. 10 ml Glycerin hinzufügen. Bringen Sie die Mischung zu einer Wärmequelle. Einige Minuten kochen lassen, bis sich alles vollständig aufgelöst hat.

15 Minuten bei 121 ° C autoklavieren. Stehen lassen und in sterilen Petrischalen bei einer Temperatur von ca. 50 ° C servieren.

Erstarren lassen, umdrehen, in Plaqueros bestellen und bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahren. Um die Cetrimid-Agarplatten zu säen, müssen sie vorab aus dem Kühlschrank genommen und auf Raumtemperatur erwärmen gelassen werden..

Der endgültige pH-Wert des Mediums muss 7,2 ± 0,2 betragen.

Die Farbe des dehydrierten Mediums ist beige und die Zubereitung ist opakweiß.

Anwendungen

Auf Cetrimidagar können alle Arten von Proben gepflanzt werden, in denen das Vorhandensein von Pseudomonas aeruginosa. Daher ist es in allen Bereichen der Mikrobiologie (Umwelt, Industrie, Klinik, Wasser und Lebensmittel) nützlich..

Es ist von großer Bedeutung, die Krankenhausumgebung zu analysieren und somit Korrekturmaßnahmen anwenden zu können, da dieser Mikroorganismus die Patienten über kontaminierte Geräte, Medikamente, Lösungen und Verbrauchsmaterialien erreicht, die vom Patienten verwendet werden.

Auf diese Weise kann der Mikroorganismus die unteren Atemwege, Harnwege und Wunden von immunsupprimierten Patienten infizieren..

Kolonie zählt von P. aeruginosa in mikrobiellen Grenzwerttests.

Gesät

Cetrimidagar kann als Primärkultur verwendet werden. Die Platte wird an einer ihrer Kanten beimpft und von dort durch Erschöpfung auf den Rest der Platte verteilt. Flüssige Proben können mit einem Drigalski-Spatel an der Oberfläche ausgesät werden.

Die Platten werden 24 Stunden bei 37 ° C aerob inkubiert.

Einschränkungen

-Ein kleiner Prozentsatz der Stämme von  Pseudomonas aeruginosas Produzieren Sie kein Pyocyanin, daher kann ein falsches Negativ interpretiert werden.

-Einige klinisch wichtige Pseudomonas-Arten sind in dieser Umgebung gehemmt.

-Trotz Beachtung der beschriebenen Eigenschaften für Pseudomonas aeruginosa, Sie müssen mit einem zusätzlichen Identifikationsnachweis bestätigt werden. Ein Test, der nicht verpasst werden sollte, ist der Oxidasetest, er muss positiv sein.

-Einige Enterobacteriaceae können auf diesem Medium wachsen und ein gelbes Pigment entwickeln, aber es unterscheidet sich von Pseudomonas aeruginosa , dass, wenn die Platte ultraviolettem Licht ausgesetzt wird, keine Fluoreszenz auftritt.

-Serratia marcescens schafft es, ein rosa Pigment zu entwickeln und zu produzieren.

-Wenn die mit Cetrimidagar besiedelten Platten eine Zeit lang Raumtemperatur ausgesetzt werden, werden die Stämme von P. aeruginosa Sie können die unter UV-Licht beobachtete Fluoreszenz verlieren. Die Eigenschaft wird jedoch wiederhergestellt, wenn sie bei 37 ° C erneut inkubiert wird.

QA

Um die gute Leistung von Cetrimid-Agar zu analysieren, können Kontrollstämme verwendet werden, wie z. Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 und Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Die erwarteten Ergebnisse sind:

  • Damit P. aeruginosa gutes Wachstum mit blaugrünem Pigment und positivem Fluorescein.
  • S. maltophilia Y. S. aureus wird teilweise bis vollständig gehemmt.
  • Es wird erwartet, dass Escherichia coli vollständig gehemmt sein.

Verweise

  1. Callicó A, Cedré B, Sifontes S., Torres V., Pino Y, Callís A., Esnard S. Phänotypische und serologische Charakterisierung klinischer Isolate von Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
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  4. BD Laboratories. BD-Pseudosel-Agar (Cetrimid-Agar). 2013. Verfügbar unter: bd.com
  5. Laboratorio Francisco Soria Melguizo, C.A. Cetrimid-Agar. 2009. Verfügbar unter: http://f-soria.es

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